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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot实验电泳、转膜请教高手
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sdws2004

金虫 (小有名气)

[交流] western blot实验电泳、转膜请教高手

western实验中转膜后发现条带总是跑不好，前几天实验的时候还跑得比较好，这几天跑出来的条带都连在一起，显影后条带也很模糊，而且都连在一起，条件什么的都没变，试剂也重新配的，找不出原因，不知道是胶的问题还是转膜的问题，请高手指点，谢谢各位大大！
（下面是跑的一个膜，新手刚开始做，很多都不懂，请指教！）

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 11:22 ]
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努力
1楼 2009-07-16 10:47:26
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antibody01

金虫 (著名写手)
★
sdws2004(金币+1,VIP+0):用丽春红染的，就这样了 7-16 16:26
上样量似乎有些大哦。到底是跑的胶还是膜？为什么有2种颜色？
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生活就像强奸，无法反抗就要学会享受； 工作就像轮奸，你不行就要别人上； 社会就像自慰，一切都要靠自己的双手解决。
2楼2009-07-16 13:15:50
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★
sdws2004(金币+1,VIP+0):还没加抗体，只染色的情况，条带不好，分不清 7-16 16:26
这个是没加抗体的吧 很象直接用丽春红染的结果
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
3楼2009-07-16 13:28:13
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
这个很正常 就是上样量比较大
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
4楼2009-07-16 17:51:05
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
sdws2004(金币+1,VIP+0):蛋白45-70 湿法转的 转膜1小时 以前还好的 现在条带老是分不好 有条带的地方 都连在一起了 分不开 很郁闷。。。 7-16 21:14
信息太少了，说的具体点，蛋白多大，转膜条件（半干，湿？）......
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会当凌绝顶，一览众山小
5楼2009-07-16 19:30:11
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baisuilan

金虫 (正式写手)
★
sdws2004(金币+1,VIP+0):谢谢 大概是上样过多的问题 7-18 20:22
这个一般说来是样品的问题。一是上样量比较大，二是制备过程浓度过大裂解不好，有粘联。
你的样品，裂解完离心没有？带着沉淀一起煮的吧？是不是上样的时候感觉有些粘糊糊的？
重新制备样品好了。或者把现在的稀释一倍再煮煮试试。降低上样量。
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6楼2009-07-17 12:45:26
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lihuanzheng

铜虫 (正式写手)
★
sdws2004(金币+1,VIP+0):谢谢指点 7-18 20:22
第一你没有说清楚孵抗时间多长，孵抗时间过长也会连在一起的，而且显影的时候最好不要显过久。
第二就是你上样量太多了如果你的蛋白表达丰度高一般30微克足够了
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7楼2009-07-18 10:18:01
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