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sdws2004

金虫 (小有名气)

[交流] western blot实验电泳、转膜请教高手

western实验中转膜后发现条带总是跑不好,前几天实验的时候还跑得比较好,这几天跑出来的条带都连在一起,显影后条带也很模糊,而且都连在一起,条件什么的都没变,试剂也重新配的,找不出原因,不知道是胶的问题还是转膜的问题,请高手指点,谢谢各位大大!
(下面是跑的一个膜,新手刚开始做,很多都不懂,请指教!)

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 11:22 ]
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antibody01

金虫 (著名写手)


sdws2004(金币+1,VIP+0):用丽春红染的,就这样了 7-16 16:26
上样量似乎有些大哦。到底是跑的胶还是膜?为什么有2种颜色?
生活就像强奸,无法反抗就要学会享受; 工作就像轮奸,你不行就要别人上; 社会就像自慰,一切都要靠自己的双手解决。
2楼2009-07-16 13:15:50
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

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sdws2004(金币+1,VIP+0):还没加抗体,只染色的情况,条带不好,分不清 7-16 16:26
这个是没加抗体的吧 很象直接用丽春红染的结果
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
3楼2009-07-16 13:28:13
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主

这个很正常 就是上样量比较大
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
4楼2009-07-16 17:51:05
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


sdws2004(金币+1,VIP+0):蛋白45-70 湿法转的 转膜1小时 以前还好的 现在条带老是分不好 有条带的地方 都连在一起了 分不开 很郁闷。。。 7-16 21:14
信息太少了,说的具体点,蛋白多大,转膜条件(半干,湿?)......
会当凌绝顶,一览众山小
5楼2009-07-16 19:30:11
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baisuilan

金虫 (正式写手)


sdws2004(金币+1,VIP+0):谢谢 大概是上样过多的问题 7-18 20:22
这个一般说来是样品的问题。一是上样量比较大,二是制备过程浓度过大裂解不好,有粘联。
你的样品,裂解完离心没有?带着沉淀一起煮的吧?是不是上样的时候感觉有些粘糊糊的?
重新制备样品好了。或者把现在的稀释一倍再煮煮试试。降低上样量。
6楼2009-07-17 12:45:26
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lihuanzheng

铜虫 (正式写手)


sdws2004(金币+1,VIP+0):谢谢指点 7-18 20:22
第一你没有说清楚孵抗时间多长,孵抗时间过长也会连在一起的,而且显影的时候最好不要显过久。
第二就是你上样量太多了如果你的蛋白表达丰度高一般30微克足够了
7楼2009-07-18 10:18:01
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