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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 回收问题求助

本人最近在做一个T载体上的目的片段回收,大小400bp左右,跑回收胶时已看到目的片段,割下来做回收,但是电泳验证时却没有目的条带。。请问是何问题??
已排除试剂盒跟操作方法问题。。。
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poog502

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
假阳性,测序鉴定目的片段
2楼2009-07-16 10:58:11
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wql1828

木虫 (小有名气)

helix

可能有   但是回收到量太少   电泳可能检测不出来
3楼2009-07-16 11:20:42
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我遇到过,量太少
我一般是通过PCR再回收
4楼2009-07-16 11:47:14
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

恩,双酶切体系是50微升的,重复做了三次都没有回收到任何东西。。
今天决定提质粒PCR后做回收,希望有新的结果。。。
谢谢楼上各位的回答。。。
5楼2009-07-16 12:46:37
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anik

银虫 (正式写手)

有没有检测过酶切效果?
6楼2009-07-16 15:31:44
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liby

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
量太少的话用乙醇沉淀回收,或者胶回收时加了Elusion后,60度水浴10分钟提高洗脱效率
7楼2009-07-16 17:05:39
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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 雨后郁金香 at 2009-7-16 12:46:
恩,双酶切体系是50微升的,重复做了三次都没有回收到任何东西。。
今天决定提质粒PCR后做回收,希望有新的结果。。。
谢谢楼上各位的回答。。。

恩,验证过了,酶切结果以及回收胶上都有我的目的片段。。可是就是回收的时候没有收回来。。。
8楼2009-07-17 09:45:44
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

拿公司去测续吧~
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
9楼2009-07-17 10:04:50
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syn1985

木虫 (正式写手)

量太少看不见
10楼2009-07-17 10:12:12
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