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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 菌体拉ＰＣＲ后电泳一片模糊
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stella0xhx

新虫 (小有名气)

[交流] 菌体拉ＰＣＲ后电泳一片模糊

用菌体做ＰＣＲ的模板，总是无目标条带，常常电泳是一片拖带现象，请教各位这是什么原因啊？
另外，用菌体做模板拉ＰＣＲ时，应该注意些什么啊？怎样才能拉出我想要的大小片段呢？请各位高手赐教啊！！
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1楼 2009-07-15 21:17:53
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icespring1983

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你说的是菌体PCR鉴定是否插入目的片段吗？
其实和正常的PCR一样，用菌体还不如用菌液PCR，虽然这两种PCR假阳性据说较多（当我们实验室一般p出来的就是插入目的片段了），就是直接挑单克隆培养，37度培养几个小时吧（我一般9-10h，过夜也可以）然后取1微培养液做模板就可以，其他条件和扩增基因是一样。电泳出现模糊我个人觉得就是非特异扩增，可能由于菌体作为模板使得模板量太大。
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3楼2009-07-15 21:36:13
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