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melody-kh

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】+ 酸性蛋白透析的问题

目前,在做酸性蛋白纯化,等电点为4.6,分子量为50000到100000,PH稳定区间为5.0——8.0.
先用硫酸铵进行两步沉淀,再用MES(PH6)10mM溶解后透析
问题:
1.透析一段时间后,有很多蛋白析出,不知道是什么原因
2.析出的蛋白变性了吗
3.能否改进,不让蛋白析出,有什么办法吗
希望版里做蛋白纯化的前辈指点给予帮助,谢谢大家!

[ Last edited by amisking on 2009-7-13 at 21:16 ]
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melody-kh

银虫 (小有名气)

如果是可逆变性的话,那透析袋中的絮状沉淀加MES溶液后应该会溶解吧?
透析结束后,袋中的絮状蛋白还要回收吧
4楼2009-07-13 22:06:28
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主

★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-13 21:32
melody-kh(金币+2,VIP+0):谢谢 7-13 22:02
melody-kh(金币+1,VIP+0): 7-14 13:00
melody-kh(金币+1,VIP+0): 8-17 21:33
MS透析的蛋白本身就会析出沉淀的吧(白色絮状物)
盐析是可逆变性 或者 根本就没变性  应该没问题的
我做蛋白透析的时候都会有沉淀的

[ Last edited by houjinglhy on 2009-7-13 at 21:33 ]
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
2楼2009-07-13 21:28:16
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主


melody-kh(金币+1,VIP+0): 7-14 13:01
引用回帖:
Originally posted by houjinglhy at 2009-7-13 21:28:
MS透析的蛋白本身就会析出沉淀的吧(白色絮状物)
盐析是可逆变性  应该没问题的

支持观点!
如果没有人帮助你,那么你就去帮助别人。
3楼2009-07-13 21:32:23
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melody-kh

银虫 (小有名气)

我试了一下,用MES析出的沉淀不溶解,估计是蛋白变性了
6楼2009-07-15 09:43:49
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