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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】+ 酸性蛋白透析的问题
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melody-kh

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】+ 酸性蛋白透析的问题

目前，在做酸性蛋白纯化，等电点为4.6，分子量为50000到100000，PH稳定区间为5.0——8.0.
先用硫酸铵进行两步沉淀，再用MES(PH6)10mM溶解后透析
问题：
1.透析一段时间后，有很多蛋白析出，不知道是什么原因
2.析出的蛋白变性了吗
3.能否改进，不让蛋白析出，有什么办法吗
希望版里做蛋白纯化的前辈指点给予帮助，谢谢大家!

[ Last edited by amisking on 2009-7-13 at 21:16 ]
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1楼 2009-07-13 21:09:29
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
★
melody-kh(金币+1,VIP+0): 7-14 13:01
引用回帖:
Originally posted by houjinglhy at 2009-7-13 21:28:
MS透析的蛋白本身就会析出沉淀的吧（白色絮状物）
盐析是可逆变性  应该没问题的

支持观点！
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如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
3楼2009-07-13 21:32:23
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-13 21:32
melody-kh(金币+2,VIP+0):谢谢 7-13 22:02
melody-kh(金币+1,VIP+0): 7-14 13:00
melody-kh(金币+1,VIP+0): 8-17 21:33
MS透析的蛋白本身就会析出沉淀的吧（白色絮状物）
盐析是可逆变性 或者 根本就没变性  应该没问题的
我做蛋白透析的时候都会有沉淀的

[ Last edited by houjinglhy on 2009-7-13 at 21:33 ]
赞一下(12人) 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2009-07-13 21:28:16
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melody-kh

银虫 (小有名气)
如果是可逆变性的话，那透析袋中的絮状沉淀加MES溶液后应该会溶解吧？
透析结束后，袋中的絮状蛋白还要回收吧
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4楼2009-07-13 22:06:28
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melody-kh

银虫 (小有名气)
我试了一下，用MES析出的沉淀不溶解，估计是蛋白变性了
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6楼2009-07-15 09:43:49
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