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【资源】pET中文操作手册（应虫友们要求）
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因为以前级别不够，无法上传附件。 此次重新上传，喜欢拥有它的虫友能够喜欢。 [ Last edited by 各输己键 on 2006-3-19 at 09:04 ] |
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4楼2006-03-19 09:05:25
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转自生物通网站－－Novagen的pET 系统—蛋白表达的金字招牌 Novagen在细菌蛋白表达产品领域是首创且一直处于领先地位的品牌。其pET系统是目前世界上被引用次数最多的蛋白表达系统。 选择Novagen的pET载体就像数1，2，3那么容易。 1. 表达水平的控制 对于一些未知和有毒性的蛋白的分析需要有严谨的启动子控制。T7启动子提供了非常严谨的控制，T7 lac 提供了最低的基础表达。那些带有pLysS或pLysE基因型的宿主菌是提供最严谨控制的重要的工具。 宿主菌的选择和启动子控制的相关信息你都可以参考Novagen pET 系统操作手册。 2.增加可溶性和折叠 通过与信号序列或是催化二硫键形成的周质蛋白(如DsbA.Tag 或是DsbC.Tag序列)相融合，可以提高目的蛋白的可溶性或形成二硫键。我们也推荐你用胞质Trx.Tag序列融合并在trxB-突变株中表达。更多有关信息可以参照Novagen pET 系统操作手册。 3.如何选择融合标签 融合标签的选择取决于下游操作的计划。由于检测和纯化往往是联系在一起，选择合适的标签对于这两个步骤都相当的重要。Novagen提供的载体上有检测、纯化及其他用途的一系列融合标签。Novagen 有不同的操作方式让你去除融合标签而获得天然活性蛋白。 4.增强目的蛋白的可溶性 BL21trxB(DE3)和AD494菌株是硫氧还蛋白还原酶 (trxB)突变体，可以促进形成二硫键。这些菌株都是卡那抗性的，所以一般选用氨苄抗性的载体(如pET-32系列)。 5.C端与N端融合 确保得到纯化全长蛋白。 6.不依赖连接反应的克隆方法(LIC) LIC是一个快速、定向克隆方法，用以在纯化后完全去处氨基端标签。pET LIC载体以线性形式提供。 |
2楼2005-11-27 14:55:45