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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【交流】晒晒蛋白胶（PAGE）染色液和脱色液的配方
汕头大学海洋科学接受调剂
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houjinglhy

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[交流] 【交流】晒晒蛋白胶（PAGE）染色液和脱色液的配方

发现蛋白胶染色液和脱色液的配方有很多。
不知道各位用的是什么样子，还有胶的处理方法
大家拿出来讨论下。
首先，我把我们实验室的记下来。

染色液：
考马斯亮蓝R250 1.2g/L ; 甲醇：水：乙酸 （5：4：1 或 4.5：4.5：1）
脱色液：
除不加考马斯亮蓝R250 其他一样。

染色：微波高火15-20S 再染1 h  或 常温 3h-过夜
         回收染料适当延长时间
脱色：脱到能看清
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
1楼 2009-07-13 15:37:05
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wql1828

木虫 (小有名气)

helix
我们用的是

染色液：
考马斯亮蓝R250 ;   乙醇：水：乙酸 脱色液：
除不加考马斯亮蓝R250 其他一样。

染色： 常温 2h     

脱色：脱一整夜
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2楼2009-07-13 15:59:59
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houjinglhy

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引用回帖:
Originally posted by wql1828 at 2009-7-13 15:59:
我们用的是

染色液：
考马斯亮蓝R250 ;   乙醇：水：乙酸 脱色液：
除不加考马斯亮蓝R250 其他一样。

染色： 常温 2h     

脱色：脱一整夜

染色液比例呢 嘿嘿
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
3楼2009-07-13 16:06:52
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)
★
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据《蛋白质技术手册》2001，科学出版社
考马斯亮蓝染液，1L：
R-250 1.0g
甲醇 450ml
蒸馏水 450ml
冰醋酸 100ml
脱色液 1L：
甲醇 100ml
冰醋酸 100ml
蒸馏水 800ml
染色常温 2h
90℃ 30min
脱色常温过夜
90℃ 2h
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开始新的学习！
4楼2009-07-13 16:17:29
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-13 17:26
引用回帖:
Originally posted by jlc0225 at 2009-7-13 16:17:
据《蛋白质技术手册》2001，科学出版社
考马斯亮蓝染液，1L：
R-250 1.0g
甲醇 450ml
蒸馏水 450ml
冰醋酸 100ml
脱色液 1L：
甲醇 100ml
冰醋酸 100ml
蒸馏水 800ml
染色常温 2h
90℃ 30min
脱色常温 ...

这个教科书上的配方（脱色液）在实际操作中肯定是不行的，甲醇和冰醋酸浓度太低会导致根本脱不了色，或者脱色太过漫长，

配方
染色液：考马斯亮蓝R-250 2.5g/L 甲醇：水：冰乙酸=4.5：4.5：1
脱色液：同上，不加考马斯亮蓝
染色：常温3h，
脱色：半小时换一次脱色液，3次后过夜脱色。
由于甲醇和冰乙酸浓度较高，胶会出现缩小，拍照时以卷曲，故拍照前用稀释后的脱色液（稀释30倍）振荡1h后拍照。
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-07-13 17:18:25
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houjinglhy

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Originally posted by susizheng at 2009-7-13 17:18:

这个教科书上的配方（脱色液）在实际操作中肯定是不行的，甲醇和冰醋酸浓度太低会导致根本脱不了色，或者脱色太过漫长，

配方
染色液：考马斯亮蓝R-250 2.5g/L 甲醇：水：冰乙酸=4.5：4.5：1
脱色液：同上 ...

刚脱色的胶确实很皱 没法拍照
脱色后的胶一般在水里泡上一天后才能拍照
泡水后胶都会变大很多
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
6楼2009-07-13 17:43:22
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)
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Originally posted by susizheng at 2009-7-13 17:18:

这个教科书上的配方（脱色液）在实际操作中肯定是不行的，甲醇和冰醋酸浓度太低会导致根本脱不了色，或者脱色太过漫长，

配方
染色液：考马斯亮蓝R-250 2.5g/L 甲醇：水：冰乙酸=4.5：4.5：1
脱色液：同上 ...

但是你的方法也需要过夜啊。我的方法脱色效果也很好，而且省试剂。
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7楼2009-07-15 10:30:55
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clbb1030

木虫 (小有名气)
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我用的脱色液是水：365ml，甲醇：35ml，冰醋酸100ml。
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8楼2009-07-15 13:26:38
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baisuilan

金虫 (正式写手)
★
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我的方法最简单！把染色液用脱色液稀释二十倍，把胶扔进去过夜，第二天就能直接看啦！不用脱色也不用换液~~
     不过，不适于蛋白上样量过低的胶。
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9楼2009-07-15 14:00:57
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houjinglhy

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引用回帖:
Originally posted by baisuilan at 2009-7-15 14:00:
我的方法最简单！把染色液用脱色液稀释二十倍，把胶扔进去过夜，第二天就能直接看啦！不用脱色也不用换液~~
     不过，不适于蛋白上样量过低的胶。

强人啊
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
10楼2009-07-15 16:40:36
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