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houjinglhy

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[交流] 【交流】晒晒蛋白胶(PAGE)染色液和脱色液的配方

发现蛋白胶染色液和脱色液的配方有很多。
不知道各位用的是什么样子,还有胶的处理方法
大家拿出来讨论下。
首先,我把我们实验室的记下来。

染色液:
考马斯亮蓝R250 1.2g/L ; 甲醇:水:乙酸 (5:4:1 或 4.5:4.5:1)
脱色液:
除不加考马斯亮蓝R250 其他一样。

染色:微波高火15-20S 再染1 h  或 常温 3h-过夜
         回收染料适当延长时间
脱色:脱到能看清
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从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
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wql1828

木虫 (小有名气)

helix

我们用的是

染色液:
考马斯亮蓝R250 ;   乙醇:水:乙酸 脱色液:
除不加考马斯亮蓝R250 其他一样。

染色: 常温 2h     

脱色:脱一整夜
2楼2009-07-13 15:59:59
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houjinglhy

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引用回帖:
Originally posted by wql1828 at 2009-7-13 15:59:
我们用的是

染色液:
考马斯亮蓝R250 ;   乙醇:水:乙酸 脱色液:
除不加考马斯亮蓝R250 其他一样。

染色: 常温 2h     

脱色:脱一整夜

染色液比例呢 嘿嘿
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
3楼2009-07-13 16:06:52
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
据《蛋白质技术手册》2001,科学出版社
考马斯亮蓝染液,1L:
R-250 1.0g
甲醇 450ml
蒸馏水 450ml
冰醋酸 100ml
脱色液 1L:
甲醇 100ml
冰醋酸 100ml
蒸馏水 800ml
染色常温 2h
90℃ 30min
脱色常温过夜
90℃ 2h
开始新的学习!
4楼2009-07-13 16:17:29
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
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司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 7-13 17:26
引用回帖:
Originally posted by jlc0225 at 2009-7-13 16:17:
据《蛋白质技术手册》2001,科学出版社
考马斯亮蓝染液,1L:
R-250 1.0g
甲醇 450ml
蒸馏水 450ml
冰醋酸 100ml
脱色液 1L:
甲醇 100ml
冰醋酸 100ml
蒸馏水 800ml
染色常温 2h
90℃ 30min
脱色常温 ...

这个教科书上的配方(脱色液)在实际操作中肯定是不行的,甲醇和冰醋酸浓度太低会导致根本脱不了色,或者脱色太过漫长,

配方
染色液:考马斯亮蓝R-250 2.5g/L 甲醇:水:冰乙酸=4.5:4.5:1
脱色液:同上,不加考马斯亮蓝
染色:常温3h,
脱色:半小时换一次脱色液,3次后过夜脱色。
由于甲醇和冰乙酸浓度较高,胶会出现缩小,拍照时以卷曲,故拍照前用稀释后的脱色液(稀释30倍)振荡1h后拍照。
Thank-you,so-blue.
5楼2009-07-13 17:18:25
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houjinglhy

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引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-7-13 17:18:

这个教科书上的配方(脱色液)在实际操作中肯定是不行的,甲醇和冰醋酸浓度太低会导致根本脱不了色,或者脱色太过漫长,

配方
染色液:考马斯亮蓝R-250 2.5g/L 甲醇:水:冰乙酸=4.5:4.5:1
脱色液:同上 ...

刚脱色的胶确实很皱 没法拍照
脱色后的胶一般在水里泡上一天后才能拍照
泡水后胶都会变大很多
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
6楼2009-07-13 17:43:22
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-7-13 17:18:

这个教科书上的配方(脱色液)在实际操作中肯定是不行的,甲醇和冰醋酸浓度太低会导致根本脱不了色,或者脱色太过漫长,

配方
染色液:考马斯亮蓝R-250 2.5g/L 甲醇:水:冰乙酸=4.5:4.5:1
脱色液:同上 ...

但是你的方法也需要过夜啊。我的方法脱色效果也很好,而且省试剂。
开始新的学习!
7楼2009-07-15 10:30:55
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clbb1030

木虫 (小有名气)


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我用的脱色液是水:365ml,甲醇:35ml,冰醋酸100ml。
8楼2009-07-15 13:26:38
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baisuilan

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我的方法最简单!把染色液用脱色液稀释二十倍,把胶扔进去过夜,第二天就能直接看啦!不用脱色也不用换液~~
     不过,不适于蛋白上样量过低的胶。
9楼2009-07-15 14:00:57
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houjinglhy

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引用回帖:
Originally posted by baisuilan at 2009-7-15 14:00:
我的方法最简单!把染色液用脱色液稀释二十倍,把胶扔进去过夜,第二天就能直接看啦!不用脱色也不用换液~~
     不过,不适于蛋白上样量过低的胶。

强人啊
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
10楼2009-07-15 16:40:36
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