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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]原核表达如何减少包涵体
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] [求助]原核表达如何减少包涵体 已有7人参与

我构建了基因工程菌（E.coli BL21(DE3)),经IPTG诱导，表达的目的蛋白几乎全部为包涵体，诱导温度已经降到了16度，真的不知道该怎么做了！请各位有经验的虫友帮帮那个忙，谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-13 at 10:24 ]
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1楼 2009-07-13 10:19:29
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jingcp200320

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果你一开始就是包涵体，根据我的经验，你想诱导表达成为上清的概率很小很小，除非你换载体，有时候换了也不行，真的，不过也许运气好就可以了，关键是要多试试几个载体，如果你表达的蛋白不是全蛋白，只是一段的话，最好开始的蛋白就是在亲水区，这样比较容易形成上清表达。至于乳糖的量，1L培养基加入2g足够！pH7.0，
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19楼2010-12-06 12:46:25
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-13 21:00
不用IPTG诱导，加少量乳糖，在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-07-13 10:35:43
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金虫鸣晓

铜虫 (小有名气)
加融合标签吧，或者在酵母中表达
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5楼2009-07-13 12:50:42
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lsbrc

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先分析你的蛋白，是否有二硫键等，有些蛋白是不适合在原核表达

也可试试MBP、NusA、Trx等促溶标签进行融合表达。
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6楼2009-07-13 12:55:06
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