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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]原核表达如何减少包涵体
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] [求助]原核表达如何减少包涵体 已有7人参与

我构建了基因工程菌（E.coli BL21(DE3)),经IPTG诱导，表达的目的蛋白几乎全部为包涵体，诱导温度已经降到了16度，真的不知道该怎么做了！请各位有经验的虫友帮帮那个忙，谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-13 at 10:24 ]
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1楼 2009-07-13 10:19:29
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
融合表达
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2楼2009-07-13 10:31:32
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-13 21:00
不用IPTG诱导，加少量乳糖，在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。
赞一下(10人) 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-07-13 10:35:43
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飞侠8683

新虫 (小有名气)
换一个表达载体
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4楼2009-07-13 11:00:53
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金虫鸣晓

铜虫 (小有名气)
加融合标签吧，或者在酵母中表达
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5楼2009-07-13 12:50:42
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lsbrc

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先分析你的蛋白，是否有二硫键等，有些蛋白是不适合在原核表达

也可试试MBP、NusA、Trx等促溶标签进行融合表达。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-07-13 12:55:06
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peng5053

银虫 (正式写手)

Dr.
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要是可以的话，你选择用自诱导培养基试试，也许会有点效果！
赞一下(1人) 回复此楼
多点思维，多点idea
7楼2009-07-13 14:23:05
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-7-13 10:35:
不用IPTG诱导，加少量乳糖，在10-16℃ 诱导2-3天。
没有别的办法了。

应该用多少乳糖呢？1mM吗？谢谢
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8楼2009-07-13 20:48:39
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 金虫鸣晓 at 2009-7-13 12:50:
加融合标签吧，或者在酵母中表达

不太懂“融合标签”，麻烦说详细一些，谢谢
赞一下 回复此楼
9楼2009-07-13 20:49:47
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lxlian507

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你诱导的时间是多长？
原核表达的时间过长，很容易产生包涵体的。
你试着缩短时间看看，或者做个时间梯度看看。
赞一下(1人) 回复此楼
学习就是进步，知足就是幸福！
10楼2009-07-14 09:46:47
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