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[求助]
RNA提取/蛋白提取
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大家好，我有以下问题想向大家求助一下： 1、用来提取RNA或者蛋白的小鼠皮肤组织，由于样本量较大，取样之后，放在冰上，过了几个小时之后才放到-80℃保存，这样的情况下，对提取RNA或者蛋白会有影响吗？ 2、组织需要用PBS清洗之后再放进EPP管中吗？如果需要，PBS的残留会对提取目标产物有影响吗？（液氮研磨+TRIzol 法提取RNA） 3、液氮研磨的时间最好控制在多久之内呢？ 4、之前提取的RNA基本都只有5S位置的条带，请问都有哪些问题会造成这样的影响呢？  11111.png |
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第一，会有很大的影响，因为冰的温度在0℃以上，这个温度可能组织里面的RNA水解酶和蛋白酶都能继续发挥作用，导致样本降解，取样时可以将样本放在干冰上面，干冰的温度为-50℃左右。第二，刚取出来的组织要尽快的使用PBS洗涤，将组织表面的血液，和脂肪去出干净。然后马上冻存。PBS对于最后的提取结果没有影响。第三，液氮研磨，你只要研磨成粉末状，且保证组织的温度不会上升上去，时间没有太多的要求，只有尽快。第四，只有5s，说明你的RNA严重降解了，原因就是前面的过程没有处理好，例如取组织的时间太长，研磨的时候没有控制好温度。------来自易基因的回答 发自小木虫Android客户端 |
4楼2021-09-05 15:36:49
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第一，会有很大的影响，因为冰的温度在0℃以上，这个温度可能组织里面的RNA水解酶和蛋白酶都能继续发挥作用，导致样本降解，取样时可以将样本放在干冰上面，干冰的温度为-50℃左右。第二，刚取出来的组织要尽快的使用PBS洗涤，将组织表面的血液，和脂肪去出干净。然后马上冻存。PBS对于最后的提取结果没有影响。第三，液氮研磨，你只要研磨成粉末状，且保证组织的温度不会上升上去，时间没有太多的要求，只有尽快。第四，只有5s，说明你的RNA严重降解了，原因就是前面的过程没有处理好，例如取组织的时间太长，研磨的时候没有控制好温度。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2021-09-05 15:35:41
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第一，会有很大的影响，因为冰的温度在0℃以上，这个温度可能组织里面的RNA水解酶和蛋白酶都能继续发挥作用，导致样本降解，取样时可以将样本放在干冰上面，干冰的温度为-50℃左右。第二，刚取出来的组织要尽快的使用PBS洗涤，将组织表面的血液，和脂肪去出干净。然后马上冻存。PBS对于最后的提取结果没有影响。第三，液氮研磨，你只要研磨成粉末状，且保证组织的温度不会上升上去，时间没有太多的要求，只有尽快。第四，只有5s，说明你的RNA严重降解了，原因就是前面的过程没有处理好，例如取组织的时间太长，研磨的时候没有控制好温度。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2021-09-05 15:36:24