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凳子大帝

新虫 (小有名气)

[求助] Topo l 酶作用的DNA松弛实验 已有1人参与

求助
做DNA松弛实验,为了研究药物的拓扑异构酶I的抑制作用。
跑了好几次胶,永远都是一条带。DNA 和 DNA+TOPO I 都跑不开,是不是我买的DNA有问题?
买的pBR322 DNA,说明书里没有写明是否是超螺旋的,是否这个实验的DNA需要自己提???
所有步骤都按照文献做了,可是结果都没有。求助做过的大神能告知一下细节~!不胜感激~!

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凳子大帝

新虫 (小有名气)

内容已删除
2楼2020-06-08 17:49:47
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


自己提质粒来测试,这个实验很简单的,电泳结果很明显。

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3楼2020-06-08 20:07:28
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
凳子大帝: 金币+10, ★★★很有帮助 2020-06-09 11:53:36
(如果是碱裂解-柱提取法)提取时候碱裂解过一点,吸取时候速度快一点,都容易产生nick导致解螺旋,得到松弛DNA。即使超螺旋DNA,保存,冻融过程都可能导致产生nick而解螺旋。

一般提取后电泳一般得到2-3条带(对应超螺旋,松弛,线性DNA)。
行至水穷处,坐看云起时
4楼2020-06-08 20:20:48
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凳子大帝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2020-06-08 20:20:48
(如果是碱裂解-柱提取法)提取时候碱裂解过一点,吸取时候速度快一点,都容易产生nick导致解螺旋,得到松弛DNA。即使超螺旋DNA,保存,冻融过程都可能导致产生nick而解螺旋。

一般提取后电泳一般得到2-3条带(对 ...

所以这个实验必须要自己提DNA嘛?买来的dna是不是多数变为了解超螺旋?

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5楼2020-06-09 02:58:15
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凳子大帝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2020-06-08 20:07:28
自己提质粒来测试,这个实验很简单的,电泳结果很明显。

所以我的这个问题就是出在DNA上么?买来的成品DNA没办法保证其超螺旋比例?

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6楼2020-06-09 02:59:25
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


7楼2020-06-09 08:42:41
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凳子大帝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by biosci at 2020-06-09 08:42:41
买来的DNA无法保证质量

好的好的,谢谢!!

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8楼2020-06-09 11:52:36
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