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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Topo l 酶作用的DNA松弛实验
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凳子大帝

新虫 (小有名气)

[求助] Topo l 酶作用的DNA松弛实验 已有1人参与

求助
做DNA松弛实验，为了研究药物的拓扑异构酶I的抑制作用。
跑了好几次胶，永远都是一条带。DNA 和 DNA+TOPO I 都跑不开，是不是我买的DNA有问题？
买的pBR322 DNA,说明书里没有写明是否是超螺旋的，是否这个实验的DNA需要自己提？？？
所有步骤都按照文献做了，可是结果都没有。求助做过的大神能告知一下细节~！不胜感激~！

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1楼 2020-06-08 17:46:17
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
凳子大帝: 金币+10, ★★★很有帮助 2020-06-09 11:53:36
（如果是碱裂解-柱提取法）提取时候碱裂解过一点，吸取时候速度快一点，都容易产生nick导致解螺旋，得到松弛DNA。即使超螺旋DNA，保存，冻融过程都可能导致产生nick而解螺旋。

一般提取后电泳一般得到2-3条带（对应超螺旋，松弛，线性DNA）。
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2020-06-08 20:20:48
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
自己提质粒来测试，这个实验很简单的，电泳结果很明显。

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3楼2020-06-08 20:07:28
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凳子大帝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2020-06-08 20:20:48
（如果是碱裂解-柱提取法）提取时候碱裂解过一点，吸取时候速度快一点，都容易产生nick导致解螺旋，得到松弛DNA。即使超螺旋DNA，保存，冻融过程都可能导致产生nick而解螺旋。

一般提取后电泳一般得到2-3条带（对 ...

所以这个实验必须要自己提DNA嘛？买来的dna是不是多数变为了解超螺旋？

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5楼2020-06-09 02:58:15
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凳子大帝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2020-06-08 20:07:28
自己提质粒来测试，这个实验很简单的，电泳结果很明显。

所以我的这个问题就是出在DNA上么？买来的成品DNA没办法保证其超螺旋比例？

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6楼2020-06-09 02:59:25
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