应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Topo l 酶作用的DNA松弛实验
51/1返回列表
查看: 1551  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

凳子大帝

新虫 (小有名气)

[求助] Topo l 酶作用的DNA松弛实验 已有1人参与

求助
做DNA松弛实验，为了研究药物的拓扑异构酶I的抑制作用。
跑了好几次胶，永远都是一条带。DNA 和 DNA+TOPO I 都跑不开，是不是我买的DNA有问题？
买的pBR322 DNA,说明书里没有写明是否是超螺旋的，是否这个实验的DNA需要自己提？？？
所有步骤都按照文献做了，可是结果都没有。求助做过的大神能告知一下细节~！不胜感激~！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2020-06-08 17:46:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
凳子大帝: 金币+10, ★★★很有帮助 2020-06-09 11:53:36
（如果是碱裂解-柱提取法）提取时候碱裂解过一点，吸取时候速度快一点，都容易产生nick导致解螺旋，得到松弛DNA。即使超螺旋DNA，保存，冻融过程都可能导致产生nick而解螺旋。

一般提取后电泳一般得到2-3条带（对应超螺旋，松弛，线性DNA）。
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
4楼2020-06-08 20:20:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
自己提质粒来测试，这个实验很简单的，电泳结果很明显。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2020-06-08 20:07:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凳子大帝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by pennchem at 2020-06-08 20:20:48
（如果是碱裂解-柱提取法）提取时候碱裂解过一点，吸取时候速度快一点，都容易产生nick导致解螺旋，得到松弛DNA。即使超螺旋DNA，保存，冻融过程都可能导致产生nick而解螺旋。

一般提取后电泳一般得到2-3条带（对 ...

所以这个实验必须要自己提DNA嘛？买来的dna是不是多数变为了解超螺旋？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2020-06-09 02:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凳子大帝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2020-06-08 20:07:28
自己提质粒来测试，这个实验很简单的，电泳结果很明显。

所以我的这个问题就是出在DNA上么？买来的成品DNA没办法保证其超螺旋比例？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2020-06-09 02:59:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭