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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR扩增目的条带很谈，也不单一是什么原因，该怎么办？
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fyn512045

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR扩增目的条带很谈，也不单一是什么原因，该怎么办？

做了好几次了，PCR扩增目的条带时有时无，有一直很谈，也不单，是怎么回事啊？请教各位

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-11 at 14:08 ]
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1楼 2009-07-11 10:05:24
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112976553

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
会不会引物的特异性不够好呢？，我最近也在烦这个事情
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2楼2009-07-11 10:15:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶活性不大ok了吧
还有就是引物的问题咯
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3楼2009-07-11 10:18:57
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txstbbm

铁虫 (小有名气)
若试剂没问题，那就做个梯度PCR看看！
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4楼2009-07-11 11:09:27
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herwan

木虫 (知名作家)

★游离希★
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很可能是引物的特异性不好
也有可能是退货温度不合适
都会使条带较弱，而且出现非特异性扩增
另外，你跑的应该是琼脂糖胶吧
建议你根据目的片段的大小调整一下胶的浓度
并不是高浓度的胶就一定更好，更有助于条带分开的
还可以适当增加一下上样量，换个孔大的梳子，多点一些样品进去
条带可能会更清晰些
你试试吧~~
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最让偶感动的一句话：“如果你愿意，你可以随时离开!"偶就这样被征服了~~~于是心中紧记“生死契阔，与子相悦；执子之手，与子偕老”！
5楼2009-07-11 12:39:35
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350784478

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的内参跑的怎么样啊？你可以把你的退火温度降一下，看看如何。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
6楼2009-07-11 14:11:07
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王雨云

金虫 (小有名气)
点样的量是不是少了
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7楼2009-07-11 15:08:52
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是引物特异性不好，或者退火温度不合适，设个温度梯度摸摸合适的退火温度，还有同样条件下做的胶薄一点效果会好一点
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8楼2009-07-11 15:20:14
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
引物设计的问题
体系不是最优的
退火温度不太适合
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9楼2009-07-11 15:40:40
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csjiang1123

木虫 (小有名气)
我也遇到这个问题 了 阳性对照很亮 郁闷
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10楼2009-07-11 23:32:25
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