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fyn512045

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR扩增目的条带很谈,也不单一是什么原因,该怎么办?

做了好几次了,PCR扩增目的条带时有时无,有一直很谈,也不单,是怎么回事啊?请教各位

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-11 at 14:08 ]
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112976553

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
会不会引物的特异性不够好呢?,我最近也在烦这个事情
2楼2009-07-11 10:15:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶活性不大ok了吧
还有就是引物的问题咯
3楼2009-07-11 10:18:57
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txstbbm

铁虫 (小有名气)

若试剂没问题,那就做个梯度PCR看看!
4楼2009-07-11 11:09:27
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herwan

木虫 (知名作家)

★游离希★


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
很可能是引物的特异性不好
也有可能是退货温度不合适
都会使条带较弱,而且出现非特异性扩增
另外,你跑的应该是琼脂糖胶吧
建议你根据目的片段的大小调整一下胶的浓度
并不是高浓度的胶就一定更好,更有助于条带分开的
还可以适当增加一下上样量,换个孔大的梳子,多点一些样品进去
条带可能会更清晰些
你试试吧~~
最让偶感动的一句话:“如果你愿意,你可以随时离开!"偶就这样被征服了~~~于是心中紧记“生死契阔,与子相悦;执子之手,与子偕老”!
5楼2009-07-11 12:39:35
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350784478

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的内参跑的怎么样啊?你可以把你的退火温度降一下,看看如何。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
6楼2009-07-11 14:11:07
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王雨云

金虫 (小有名气)

点样的量是不是少了
7楼2009-07-11 15:08:52
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是引物特异性不好,或者退火温度不合适,设个温度梯度摸摸合适的退火温度,还有同样条件下做的胶薄一点效果会好一点
8楼2009-07-11 15:20:14
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

引物设计的问题
体系不是最优的
退火温度不太适合
9楼2009-07-11 15:40:40
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csjiang1123

木虫 (小有名气)

我也遇到这个问题 了 阳性对照很亮 郁闷
10楼2009-07-11 23:32:25
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