应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR扩增目的条带很谈，也不单一是什么原因，该怎么办？
202/2返回列表上一页12
查看: 1438  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

stella0xhx

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物特异性不好，升高点温度，循环次数多点看，重新设计一下引物吧
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2009-07-12 09:50:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

witch-dj

木虫 (著名写手)

快乐家族-witchdj
退火温度进行一下调整
查一下引物特异性吧
赞一下 回复此楼
12楼2009-07-12 22:21:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fyn512045

新虫 (初入文坛)

谢谢各位了

我的上样量是20微升，退货温度间隔也很大，在四五度左右，有的话各个梯度都有，没有的话都没有，我现在想是不是酶的问题，我25微升体系，加大概0.5微升酶。
赞一下 回复此楼
13楼2009-07-13 10:23:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ly888lsp

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
原因：

（1）引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。（2）Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。（3）酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。

对策：①必要时重新设计引物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。⑤降低Mg2+浓度。
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2009-07-15 09:50:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuanzheng

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是你加样的时候，上每个体系的酶由于枪头沾有，体系不准确
第二就是是不是你提的DNA酒精过高，这样也会影响扩增的
第三就可能是你的引物设计特异性不好
你可以降低下温度看看
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2009-07-18 10:38:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuanzheng

铜虫 (正式写手)
最好用50微升的体系
建议采用Mix或者你上样前把每个体系反应液配好再分装
赞一下 回复此楼
16楼2009-07-18 10:40:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

smallcat227

木虫 (著名写手)
重新设计引物……
赞一下 回复此楼
17楼2009-07-19 21:13:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做一个温度梯度吧 温度不合适
或者适当提高点模板量
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2009-07-27 16:25:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先，你的模板质量如何，这对PCR是最关键的。其次，引物设计的有没有问题，序列分析怎么样。PCR程序怎么样，退火温度的考察很关键。
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2009-07-28 11:00:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议设置温度梯度，筛选合适的扩增温度，祝楼主顺利
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2009-07-28 16:59:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fyn512045 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭