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fyn512045

新虫 (初入文坛)

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虫号: 382374
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专业: 农药分子毒理

[交流] PCR扩增目的条带很谈，也不单一是什么原因，该怎么办？

做了好几次了，PCR扩增目的条带时有时无，有一直很谈，也不单，是怎么回事啊？请教各位

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-11 at 14:08 ]

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1楼 2009-07-11 10:05:24

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ly888lsp

木虫 (小有名气)

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虫号: 753876
注册: 2009-04-21
性别: GG
专业: 色谱分析

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

原因：

（1）引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。（2）Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。（3）酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。

对策：①必要时重新设计引物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。④适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。⑤降低Mg2+浓度。