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LFR空气晴

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于sanger测序的一点问题 已有1人参与

为什么要用放射性同位素标记任意一种dNTP,而不是引物或ddNTP?我觉得如果在某条链终止前没有该种被标记的dNTP,那么在最后放射自显影是不就无法显示这条核苷酸吗?

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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果标记引物,随着链的延伸与中止,整个信号被稀释到不同的ladder中,后面的信号会越来越弱。

如果标记ddNTP,只有最后一个中止的碱基有荧光的,电泳胶图,看到不是ladder信号

如果标记某一种dNTP,随着链延长,信号会(相对)均一的分布在不同ladder中,能看到每个碱基的放射性,同时信号不会衰减。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2020-05-22 21:29:27
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