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LFR空气晴

新虫 (初入文坛)

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专业: 生物化学

[求助] 关于sanger测序的一点问题已有1人参与

为什么要用放射性同位素标记任意一种dNTP，而不是引物或ddNTP?我觉得如果在某条链终止前没有该种被标记的dNTP,那么在最后放射自显影是不就无法显示这条核苷酸吗？

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1楼 2020-05-22 07:29:18

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pennchem

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专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

如果标记引物，随着链的延伸与中止，整个信号被稀释到不同的ladder中，后面的信号会越来越弱。

如果标记ddNTP，只有最后一个中止的碱基有荧光的，电泳胶图，看到不是ladder信号

如果标记某一种dNTP，随着链延长，信号会（相对）均一的分布在不同ladder中，能看到每个碱基的放射性，同时信号不会衰减。

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行至水穷处，坐看云起时

2楼2020-05-22 21:29:27