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04swlcm

金虫 (小有名气)


[交流] 电击转化

最近做了几次电击转化巨大芽孢杆菌,都不成功,前两个月做过一次成功了,现在重复却总是转不成功,不知道什么原因,请有经验的朋友多指教,先谢谢了。
我将电击转化(2500V,4ms)后孵育2-3h后涂布含抗生素平板,不长菌,涂布不含抗生素的平板,就长菌了,说明质粒未转进去,不知是不是感受态的问题??
同时我做了阴性对照,只用感受态电击,涂布抗性平板,不长菌
用空载体电击转化做阳性对照,也没长菌,统统说明质粒没转进去,真不知道什么原因,是感受态感受性不强还是电击转化过程有问题,请大家指教!谢谢
另外,请问如何证明感受态是否有问题?

[ Last edited by amisking on 2010-2-20 at 19:53 ]
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

帮着顶,学习一下
7楼2010-02-20 20:09:35
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由,人权之基。

优秀版主

★ ★
04swlcm(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 2010-02-20 19:13
我做乳酸菌电转化 做了快一年了 才知道是菌不对 汗死!!!!
点转化效率很高的 主要是感受态细胞要处于对数期
涂布不含抗生素的平板,就长菌了 说明电压条件至少不高
换个宿主菌试试吧 感受态细胞多喜几次
从小就学习鲁迅,直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助,却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊!
2楼2009-07-08 22:58:23
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tannjqq

木虫 (正式写手)


04swlcm(金币+1):谢谢参与
4ms?我做的好像是5哎。。
greing~
4楼2010-02-12 19:01:36
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yjingmo

木虫 (著名写手)

修筑


04swlcm(金币+1):谢谢参与
电压可能高了 建议做电压梯度 并参考相关文献
另外要保证感受态是没有问题的 这是前提
如果我成功了,那么我比别人幸运;如果我失败了,那么我还不够努力!
5楼2010-02-12 21:04:32
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