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04swlcm

金虫 (小有名气)

[交流] 电击转化

最近做了几次电击转化巨大芽孢杆菌，都不成功，前两个月做过一次成功了，现在重复却总是转不成功，不知道什么原因，请有经验的朋友多指教，先谢谢了。
我将电击转化（2500V，4ms）后孵育2-3h后涂布含抗生素平板，不长菌，涂布不含抗生素的平板，就长菌了，说明质粒未转进去，不知是不是感受态的问题？？
同时我做了阴性对照，只用感受态电击，涂布抗性平板，不长菌
用空载体电击转化做阳性对照，也没长菌，统统说明质粒没转进去，真不知道什么原因，是感受态感受性不强还是电击转化过程有问题，请大家指教！谢谢
另外，请问如何证明感受态是否有问题？

[ Last edited by amisking on 2010-2-20 at 19:53 ]
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1楼 2009-07-08 22:40:19
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★ ★
04swlcm(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+1): 2010-02-20 19:13
我做乳酸菌电转化 做了快一年了 才知道是菌不对 汗死！！！！
点转化效率很高的 主要是感受态细胞要处于对数期
涂布不含抗生素的平板，就长菌了 说明电压条件至少不高
换个宿主菌试试吧 感受态细胞多喜几次
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从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2009-07-08 22:58:23
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louyiceng
★
04swlcm(金币+1):谢谢参与
1949stone:区长大人也发纯表情啊 2010-02-20 19:14
3楼2010-02-12 13:02:49
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tannjqq

木虫 (正式写手)
★
04swlcm(金币+1):谢谢参与
4ms？我做的好像是5哎。。
赞一下(1人) 回复此楼
greing~
4楼2010-02-12 19:01:36
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yjingmo

木虫 (著名写手)

修筑
★
04swlcm(金币+1):谢谢参与
电压可能高了 建议做电压梯度 并参考相关文献
另外要保证感受态是没有问题的 这是前提
赞一下(1人) 回复此楼
如果我成功了，那么我比别人幸运；如果我失败了，那么我还不够努力！
5楼2010-02-12 21:04:32
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jlspxhw
★
04swlcm(金币+1):谢谢参与
1949stone:又是纯表情 2010-02-20 19:14
6楼2010-02-20 18:35:52
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)
帮着顶，学习一下
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7楼2010-02-20 20:09:35
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songpengju

新虫 (初入文坛)
帮着顶，学习一下
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8楼2010-03-01 11:20:50
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