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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)

[交流] 蛋白酶的大小亚基能否分开表达 已有2人参与

想请教一下做蛋白酶异源表达的大佬们,由于我做的酶是有大小两个亚基组装而成的,但是表达一直检测不到催化活性,所以想可不可以借助petduet之类的质粒将两个亚基分别表达,但是关于组装的原理现在并没有研究清楚,想问一下有没有师兄师姐做过这方面的研究啊

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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 博士苑 at 2020-04-28 11:31:21
在俩亚基之间加个自裂肽,表达出的蛋白会自动断裂形成俩亚基,尝试下,说不定有效果

嗯嗯,但是我表达的这个酰化酶本身就是有一段连接肽的,但是在大肠杆菌中表达后发现不仅有包涵体,还出现了大亚基偏大小亚基偏小的奇怪现象

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5楼2020-04-28 18:34:26
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pennchem

专家顾问 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以尝试,有成功的例子
如,human DNA polymerase delta,4个亚基共表达,能得到活性蛋白
但是 AMV逆转录酶,大小亚基(小亚基比大亚基少一段),在大肠杆菌中表达不是很好
行至水穷处,坐看云起时
2楼2020-04-28 08:13:48
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博士苑

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
在俩亚基之间加个自裂肽,表达出的蛋白会自动断裂形成俩亚基,尝试下,说不定有效果
3楼2020-04-28 11:31:21
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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2020-04-28 08:13:48
可以尝试,有成功的例子
如,human DNA polymerase delta,4个亚基共表达,能得到活性蛋白
但是 AMV逆转录酶,大小亚基(小亚基比大亚基少一段),在大肠杆菌中表达不是很好

好的谢谢大佬,我今天也查到了一个酰化酶大小亚基分别表达的

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4楼2020-04-28 18:32:43
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