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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白酶的大小亚基能否分开表达
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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)

[交流] 蛋白酶的大小亚基能否分开表达 已有2人参与

想请教一下做蛋白酶异源表达的大佬们，由于我做的酶是有大小两个亚基组装而成的，但是表达一直检测不到催化活性，所以想可不可以借助petduet之类的质粒将两个亚基分别表达，但是关于组装的原理现在并没有研究清楚，想问一下有没有师兄师姐做过这方面的研究啊

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1楼 2020-04-27 19:35:50
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以尝试，有成功的例子
如，human DNA polymerase delta，4个亚基共表达，能得到活性蛋白
但是 AMV逆转录酶，大小亚基（小亚基比大亚基少一段），在大肠杆菌中表达不是很好
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2020-04-28 08:13:48
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博士苑

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
在俩亚基之间加个自裂肽，表达出的蛋白会自动断裂形成俩亚基，尝试下，说不定有效果
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3楼2020-04-28 11:31:21
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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2020-04-28 08:13:48
可以尝试，有成功的例子
如，human DNA polymerase delta，4个亚基共表达，能得到活性蛋白
但是 AMV逆转录酶，大小亚基（小亚基比大亚基少一段），在大肠杆菌中表达不是很好

好的谢谢大佬，我今天也查到了一个酰化酶大小亚基分别表达的

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4楼2020-04-28 18:32:43
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一点寒芒先到

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 博士苑 at 2020-04-28 11:31:21
在俩亚基之间加个自裂肽，表达出的蛋白会自动断裂形成俩亚基，尝试下，说不定有效果

嗯嗯，但是我表达的这个酰化酶本身就是有一段连接肽的，但是在大肠杆菌中表达后发现不仅有包涵体，还出现了大亚基偏大小亚基偏小的奇怪现象

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5楼2020-04-28 18:34:26
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