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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

[交流] 真核来源的基因表达问题

我把真核来源的基因放在啤酒酵母宿主里表达,一定需要用终止子吗,如果不用可以用什么序列来替代呢?
在这个目的基因后面跟着有筛选标记基因(实验室自主研发),我需要它表达,那也是否需要一个完整的表达盒呢?
具体如下面图所示:

--PGK1启动子--a factor signalP--目的基因前肽+成熟肽--ADH1终止子--启动子--筛选标记---终止子---

上面很多元件都需要克隆,我觉得很麻烦,请教大家,能不能简化而又能达到试验目的呢?十分感谢!!!!!
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your2007

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
所选载体自身带有终止子就不用了,自己多搜搜真核表达载体系统啊,应该有你需要的,
爱人者被爱,敬人者人敬
2楼2009-07-07 15:15:44
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

a factor signalP和目的基因前肽重复,保留前者就行了
3楼2009-07-07 15:22:06
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

我用的是线性片段整合插入到染色体DNA上,真核表达载体不多,特别是对啤酒酵母而言吧。
a factor是信号肽,前肽是信号肽和成熟肽之间的部分,两者不是一样的功能吧
请教了!!!
4楼2009-07-07 18:53:12
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
完整的a factor是prepro结构的信号肽
你要表达的应该是带pro肽的目的蛋白
a factor的pro肽也可以促进目的蛋白的分泌
5楼2009-07-07 19:56:08
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

那我用a factor+目的蛋白的前肽+成熟肽这样的结构单元,可以吗?
6楼2009-07-07 20:27:38
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-7 21:12
理论上是可以的。
但如果你的目的是拿到成熟肽的话,我觉得首选组合是:a factor+目的蛋白成熟肽
7楼2009-07-07 20:47:05
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维纳斯的骑士

金虫 (小有名气)

如果是原核表达载体上的信号肽,是不是也一样是信号肽+目的蛋白成熟肽?
不是说去掉前肽,蛋白无法正确折叠吗?
8楼2009-07-07 21:47:24
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