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重组杆状病毒感染SF9细胞不表达目的蛋白
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各位同学，最近用重组杆状病毒感染SF9细胞表达蛋白，但是遇到了一些问题请教大家： 重组杆状病毒是由生物公司合成提供的，经qPCR验证含有目的基因片段。 1、SF9细胞28℃震荡培养至1*10^6密度，重组杆状病毒（P3代）按照MOI=0.1、5、20感染细胞。病毒感染SF9细胞以后，与阴性对照相比，细胞病变并不明显，只有一点点变大，但是也不是很明显，但是细胞明显生长变缓，细胞数基本不增加。病毒刚感染细胞和感染培养3天以后分别收获上清经qPCR验证，CT值缩小了10，是否可以确定病毒已经成功感染细胞并且增值？ 2、蛋白是胞内蛋白，感染3天以后离心沉淀经RIP高效裂解液（索莱宝）裂解后进行SDS-PAGE，考马斯染色没有目的蛋白条带。与阳性蛋白（外包公司合成并纯化的蛋白）一起进行WB，ECL显色后，阳性蛋白明显有条带，但是自己做的一点都没有，是否说明蛋白没有表达？ 3、我把MOI做了0.1、5、10、20，SDS-PAGE结果都没有蛋白条带。 4、有没有病毒本身成功感染并增殖，但是不表达蛋白的可能性？如果我要得到表达蛋白，应该如何改进我的实验条件？不表达蛋白的问题可能是什么？谢谢！ |
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