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hht4275

铜虫 (小有名气)

[求助] pTrc99a构的载体转入W3110后,在抗性平板上能长起来,但PCR没有条带是因为什么? 已有2人参与

pTrc99a构的载体转入W3110后,在抗性平板上能长起来,但PCR没有条带是因为什么?抽质粒基本上也抽不出来。未转质粒的W3110在抗性平板上不长 @youlinglyw
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hht4275

铜虫 (小有名气)

找到原因了,LB中可能会有乳糖,乳糖会导致pTrc99a被诱导表达而复制量很少难以检测,在培养基中加入1~2%的葡萄糖就可以解决了,菌液pcr和抽质粒都没问题了 @youlinglyw
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9楼2020-06-16 15:50:15
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


这个99a载体是tac启动子,表达量还可以,容易行成可溶蛋白

发自小木虫Android客户端
2楼2020-04-15 12:40:05
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hht4275: 金币+1, 有帮助 2020-04-17 11:25:07
构建的载体经过测序验证吗?
3楼2020-04-16 11:08:08
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ECUST_CAPF

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hht4275: 金币+2, 有帮助 2020-04-17 11:24:42
首先排除一下低级错误:确认质粒是否正确,PCR引物序列是否正确,抗性平板抗性对不对

这个实验你做了几次?如果只做了一次建议重复一下,如果每次都是这样,看一下质粒上的序列是否重组过其他基因
Behind the glory is a loneliness
4楼2020-04-16 11:38:14
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