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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » pTrc99a构的载体转入W3110后，在抗性平板上能长起来，但PCR没有条带是因为什么？
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hht4275

铜虫 (小有名气)

[求助] pTrc99a构的载体转入W3110后，在抗性平板上能长起来，但PCR没有条带是因为什么？ 已有2人参与

pTrc99a构的载体转入W3110后，在抗性平板上能长起来，但PCR没有条带是因为什么？抽质粒基本上也抽不出来。未转质粒的W3110在抗性平板上不长 @youlinglyw
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爱老婆，爱家人，爱自己，爱你们
1楼 2020-04-15 11:24:11
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angnay

铜虫 (著名写手)
你好 质粒pTrc99a能馈赠吗？最近表达蛋白好多包涵体 没法做后续酶活~~
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8楼2020-06-08 13:04:54
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
这个99a载体是tac启动子，表达量还可以，容易行成可溶蛋白

发自小木虫Android客户端
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2楼2020-04-15 12:40:05
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hht4275: 金币+1, ★有帮助 2020-04-17 11:25:07
构建的载体经过测序验证吗？
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3楼2020-04-16 11:08:08
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ECUST_CAPF

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hht4275: 金币+2, ★有帮助 2020-04-17 11:24:42
首先排除一下低级错误：确认质粒是否正确，PCR引物序列是否正确，抗性平板抗性对不对

这个实验你做了几次？如果只做了一次建议重复一下，如果每次都是这样，看一下质粒上的序列是否重组过其他基因
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Behind the glory is a loneliness
4楼2020-04-16 11:38:14
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