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真好呀ya

新虫 (小有名气)

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[求助] IPTG诱导已有1人参与

加IPTG诱导的比未加IPTG诱导的多出一条带，这条带是目的蛋白，还是重组蛋白的呀？
或者说目的蛋白就是重组蛋白？

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1楼 2020-04-07 18:08:46

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原海亮

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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在蛋白异源表达的实验中，将目的蛋白基因克隆至载体，构建好的就是重组载体，转化至宿主细胞进行目的蛋白表达，获得的高量表达蛋白就是重组蛋白。这里需要注意的是，有些重组载体构建时，会带有相应蛋白标签，多用于目的蛋白的分离纯化，这时候携带标签的蛋白
通常叫做融合蛋白（比如GST-目的蛋白，His-目的蛋白等），当蛋白标签GST、His被切除后，获得的蛋白才是你的目的蛋白。
  当然，目的蛋白的定义是相对的，其实还是根据你实验的目的来确定的，他并不是一个通用特定的名字，比如你进行蛋白表达目的是为了获得与原始氨基酸序列一致的蛋白，那么你的目的蛋白就是这个分子量的大小的蛋白，如果你的实验目的是为了获得一个携带标签的融合蛋白，那么在这个实验里，融合蛋白就是你的目的蛋白。
  如果是简单的蛋白克隆异源表达，通过page胶基本就可以确定目标蛋白分子量位置是否有表达（这里要注意你的载体构建时是否携带标签，如果携带，那么PAGE胶中就要考虑到标签的分子量）。当然如果是抗体类的产品，可能需要更加严格的实验来判断分子量的准确性。
祝好