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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pTrc99a可以在BL21/rosetta/BW25113/W3110中表达吗？
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hht4275

铜虫 (小有名气)

[求助] pTrc99a可以在BL21/rosetta/BW25113/W3110中表达吗？

问题一、pTrc99a可以在BL21/rosetta/BW25113/W3110中表达吗？
问题二、pTrc99a构的载体转入W3110后，在抗性平板上能长起来，但PCR没有条带是因为什么？抽质粒基本上也抽不出来。未转质粒的W3110在抗性平板上不长
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爱老婆，爱家人，爱自己，爱你们
1楼 2020-04-04 15:34:00
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biosci

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可以在bl21里面表达，因为这个载体是

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2楼2020-04-04 20:37:21
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
lac和tro

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3楼2020-04-04 20:42:59
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
启动子是lac，trp杂合启动子，trc启动子，启动活性比t7弱

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4楼2020-04-04 20:43:51
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hht4275

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biosci at 2020-04-04 20:43:51
启动子是lac，trp杂合启动子，trc启动子，启动活性比t7弱

pTrc99a构的载体转入W3110后，在抗性平板上能长起来，但PCR没有条带是因为什么？抽质粒基本上也抽不出来。未转质粒的W3110在抗性平板上不长。大神知道这是什么原因吗？该怎么解决。文献里pTrc99a载体是可以转W3110的
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5楼2020-04-07 09:17:48
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biosci

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你的w3110菌株鉴定过吗？有没有问题

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6楼2020-04-07 09:54:47
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soarshining

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引用回帖:
5楼: Originally posted by hht4275 at 2020-04-07 09:17:48
pTrc99a构的载体转入W3110后，在抗性平板上能长起来，但PCR没有条带是因为什么？抽质粒基本上也抽不出来。未转质粒的W3110在抗性平板上不长。大神知道这是什么原因吗？该怎么解决。文献里pTrc99a载体是可以转W3110 ...

看结果除非涂板出现污染，否则肯定转进去了，不然不会出现抗性生长。抽质粒是单克隆扩增起来的吗？
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7楼2020-04-07 22:20:42
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hht4275

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by soarshining at 2020-04-07 22:20:42
看结果除非涂板出现污染，否则肯定转进去了，不然不会出现抗性生长。抽质粒是单克隆扩增起来的吗？...

是的，用的生工的一步法做感受态做的转化，长得单克隆不多，但确实长了
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8楼2020-04-10 16:39:46
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hht4275

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by biosci at 2020-04-07 09:54:47
你的w3110菌株鉴定过吗？有没有问题

因为我还要敲w31100的一个基因，用设计的引物能把w3110的一个基因片段pcr出来的，基因组应该没错吧。鉴定的话怎么鉴定，进行菌株鉴定吗？
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9楼2020-04-10 16:42:30
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