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信天谨游

新虫 (正式写手)

[交流] BCA蛋白测定,空白吸光度大于样品吸光度的问题。 已有3人参与

再下小虫一枚,望各位有过经验的不吝赐教。
实验目的是测定样品中蛋白浓度计算回收率。会按照同方法做不加样品的管作为空白对照。在BCA 测蛋白浓度时得到的结果确实空白的吸光度大于样品的吸光度。这样算下来样品中含有的蛋白量就是负数了。这是不符合实验的。
(已经扫描过空白样品中所含的物质在紫外区没有吸光度)
若把样品和空白稀释10倍,发现稀释后的吸光度与稀释之前的竟差不多,有几个孔甚至还略高与稀释前的。老师说生物样品就是会出现越稀释越高的现象。
我不太懂。
我现在想知道我该怎么修改实验过程或是换其他方法,能准确测定蛋白浓度呢?望各位老师同学给点高见?

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fu251628849

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
之前测蛋白浓度,就是因为空白对照加样时不小心出现了气泡,就出现你说的情况,不知道你的是啥情况?我也做过类似你说的实验,就是空白没有任何东西,只是和处理组的操作过程一样,加了同样的处理试剂,做过不少,但没出现你说的情况。

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2楼2020-04-01 21:54:03
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信天谨游

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fu251628849 at 2020-04-01 21:54:03
之前测蛋白浓度,就是因为空白对照加样时不小心出现了气泡,就出现你说的情况,不知道你的是啥情况?我也做过类似你说的实验,就是空白没有任何东西,只是和处理组的操作过程一样,加了同样的处理试剂,做过不少,但 ...

感谢回复。下次我注意一下实验操作。

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3楼2020-04-01 22:55:48
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ECUST_CAPF

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
样品稀释到标曲的中间线性部分最好,另外比色皿洗洗干净,是用sigma那个倒吸的装置(死贵死贵的,一个玻璃架子1000+大洋)配上真空泵抽洗的吗?那样会相对干净些,而且能抽干
Behind the glory is a loneliness
4楼2020-04-09 14:55:23
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信天谨游

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ECUST_CAPF at 2020-04-09 14:55:23
样品稀释到标曲的中间线性部分最好,另外比色皿洗洗干净,是用sigma那个倒吸的装置(死贵死贵的,一个玻璃架子1000+大洋)配上真空泵抽洗的吗?那样会相对干净些,而且能抽干

比色用的96孔板,不会重复用。

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5楼2020-04-09 15:49:37
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weebug

版主 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有没做一个标准曲线
天蓝蓝兮日头晒
6楼2020-04-10 10:11:51
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信天谨游

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by weebug at 2020-04-10 10:11:51
有没做一个标准曲线

有做标准曲线,标准曲线的浓度是正常的。线性也很好。

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7楼2020-04-10 10:36:46
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