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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] ITS怎么测序? 已有1人参与

第一次用PCR产物测ITS序列,都有杂峰。是不是等位基因的问题?求助做过ITS测序的木虫。
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zero406

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jurkat.1640: 金币+1, 有帮助 2020-03-29 17:32:02
是不是DNA不纯~PCR产物杂的~所有测出来杂峰
2楼2020-03-29 11:25:22
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zero406 at 2020-03-29 11:25:22
是不是DNA不纯~PCR产物杂的~所有测出来杂峰

同样的DNA样品,测其它基因没问题
3楼2020-03-29 17:31:40
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NAIVE.

新虫 (初入文坛)

PCR产物测序有杂峰很可能是引物的结合不够好,或者退火温度过低的原因。没问题的话可以将PCR产物纯化之后保存在ddH2O中,保存在Elution Buffer中对测序会有影响,导致出现问题。

发自小木虫IOS客户端
4楼2020-03-31 23:13:40
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Emothy-stef

新虫 (小有名气)

不难,能扩增出来说明核酸序列应该不复杂,建议连接到T载体上用载体通用引物测序。

发自小木虫Android客户端
5楼2020-04-05 23:04:33
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Emothy-stef at 2020-04-05 23:04:33
不难,能扩增出来说明核酸序列应该不复杂,建议连接到T载体上用载体通用引物测序。

确实得挑克隆测序
6楼2021-07-07 09:51:15
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