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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助PCR
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xiaofan66

[交流] 求助PCR

想扩大产物量，就以PCR产物为模板（1uL/10uL）再进行PCR，跑琼脂糖检测的时候，发现从点样孔到我的目的片段出都呈弥散，弥散非常均匀且没有条带，更奇怪的是在目的片段那弥散戛然而止，一开始怀疑模板浓度太大了，进行了10倍，100倍稀释，P出的结果还是这样，你们说这是为什么呢？郁闷死了！
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1楼 2009-07-02 08:38:08
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
这种情况倒是没有遇到过，
感觉好像是都降解了的样子。。。
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
3楼2009-07-02 08:43:42
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weiwei1

木虫 (小有名气)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
这么说，原来曾经得到过目的产物了。只是想得到更多的产物的话，可以按照原来的体系，多做几管就是了，不用做产物PCR啊。
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2楼2009-07-02 08:42:39
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wjw992008

银虫 (小有名气)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
这种情况我们在做基因组步移的时候经常见到，不知道是什么原因。我们把最前端最亮的一段进行克隆测序有时候也能得到想要的片断。
有可能是引物不太合适吧，你也试试回收前面一小段做为模板再扩增？
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4楼2009-07-02 08:48:17
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rainbamboo8707

金虫 (小有名气)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
稀释倍数太少了。第一次PCR产量高(电泳可见扩增带)，一般稀释1000-10000倍。你可以重新稀释，减少循环数再试试
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5楼2009-07-02 09:01:11
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