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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助PCR
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xiaofan66

[交流] 求助PCR

想扩大产物量，就以PCR产物为模板（1uL/10uL）再进行PCR，跑琼脂糖检测的时候，发现从点样孔到我的目的片段出都呈弥散，弥散非常均匀且没有条带，更奇怪的是在目的片段那弥散戛然而止，一开始怀疑模板浓度太大了，进行了10倍，100倍稀释，P出的结果还是这样，你们说这是为什么呢？郁闷死了！
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1楼 2009-07-02 08:38:08
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weiwei1

木虫 (小有名气)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
这么说，原来曾经得到过目的产物了。只是想得到更多的产物的话，可以按照原来的体系，多做几管就是了，不用做产物PCR啊。
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2楼2009-07-02 08:42:39
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zplipeng

金虫 (著名写手)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
这种情况倒是没有遇到过，
感觉好像是都降解了的样子。。。
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加油哦↖(^ω^)↗，O(∩_∩)O哈哈~
3楼2009-07-02 08:43:42
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wjw992008

银虫 (小有名气)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
这种情况我们在做基因组步移的时候经常见到，不知道是什么原因。我们把最前端最亮的一段进行克隆测序有时候也能得到想要的片断。
有可能是引物不太合适吧，你也试试回收前面一小段做为模板再扩增？
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4楼2009-07-02 08:48:17
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rainbamboo8707

金虫 (小有名气)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
稀释倍数太少了。第一次PCR产量高(电泳可见扩增带)，一般稀释1000-10000倍。你可以重新稀释，减少循环数再试试
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5楼2009-07-02 09:01:11
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j2

木虫 (正式写手)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
同意2楼，按以前的多扩几管就行了啊
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
6楼2009-07-02 09:04:37
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fromstick

银虫 (正式写手)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
我也是多阔几管。
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虽然我是个菜鸟，但我依然热爱生物学！
7楼2009-07-02 09:13:15
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
个人经验，你稀释的倍数太少了，同意楼上的观点
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8楼2009-07-02 09:14:34
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
o(∩_∩)o...第一次PCR的产物用的太多了,把1ul梯度稀释了作,至少稀释100倍.
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
9楼2009-07-02 09:15:28
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350784478

木虫 (正式写手)
★
xiaofan66(金币+1):谢谢参与
个人同意四楼的观点，你把稀释倍数再扩大一点，看看能出结果不.
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
10楼2009-07-02 09:32:31
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