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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：关于PCR产物的连接到入门载体中
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新人小玥

木虫 (正式写手)

[交流] 求助：关于PCR产物的连接到入门载体中

请问一下，有没有人知道
怎样可以提高PCR片段连入入门载体pCR8/GW TOPO上的效率？
我的PCR片段是3300左右的大小，使用切胶回收的。

哪位高手可以给我点建议，小女子在这谢过了！！！

[ Last edited by amisking on 2009-8-1 at 16:14 ]
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1楼 2009-07-01 23:20:03
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lynn5180

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们都是直接连的，做完PCER切胶回收和供体25度反映过夜，第二天加蛋白酶K然后取一半转化，万一不成功再用剩余的一半
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2楼2009-07-02 11:15:12
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新人小玥

木虫 (正式写手)
请问您所连的片段有3000多bp吗？
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3楼2009-07-02 11:58:10
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
如果是普通taq酶的pcr产物，建议把最后一步72℃延长到15min以上。如果是高保真酶，建议做完pcr后，用普通taq没给pcr产物加A
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4楼2009-07-02 12:13:32
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连接几小时候可以补加少量连接酶buffer以补充消耗的ATP
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5楼2009-07-20 22:17:44
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wangtengxu

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
延长时间以及提高模板质量，有助于提高效率。
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想和有趣的人一起做有趣的事。
6楼2009-07-20 22:26:43
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zjwang

木虫 (正式写手)
????
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7楼2009-07-30 18:53:52
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sunqx

木虫 (著名写手)
我觉得增加连接时间，选取好的感受态，可以会好一些
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8楼2009-08-01 15:55:40
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