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liuxu321

新虫 (小有名气)


已领完
真核细胞中融合表达
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有没有做过基因工程蛋白表达方面的,就是基因融合技术,需要在真核细胞中表达,这个一系列过程是怎么样的,需要注意哪些问题,比如怎么选载体,怎么在文献中找这些合适的实验方法,实在看的懵逼

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新虫 (正式写手)


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我可以有偿提供技术指导

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10楼2020-03-05 23:04:41
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
瞬转还是稳转,稳转就用慢病毒载体

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11楼2020-03-06 11:33:02
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北京艾柏森

铁虫 (小有名气)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以在网上买分子实验技术,丁香园查找,或者找相关文献。
12楼2020-03-11 15:42:14
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北京艾柏森

铁虫 (小有名气)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
常见的真核表达系统:
1.酵母:常用载体pPICZα,宿主菌GS115
2.哺乳动物细胞:常用载体pCDNA3.1,细胞HEK293
3.昆虫杆状病毒:载体bacmid,昆虫SF9细胞
4.枯草芽孢杆菌:载体pHT-43,枯草杆菌
常规实验流程:1)密码子优化,基因合成
2)载体构建
3)转化筛选表达菌株或细胞
4)小试表达测试
5)扩大培养蛋白纯化
选择好相对应的表达系统后,考虑这段基因的表达产物(即蛋白)最后是否需要附加上标签(tag)以用于后续的分离纯化,以及这个标签是加在C末端还是N末端等,然后根据你的实验目的确定你所需要的表达量,是采用一个含有强启动子的载体来过量表达蛋白,还是只需要一个普通的启动子即可。根据以上原则做一个初筛,之后再根据载体说明书进一步筛选,载体说明书上都会有详细的介绍,包括启动子、克隆方法、载体抗性、筛选标记、质粒类型、表达条件等。关于文献,一般搜索相应的表达系统,会有相关的文献出来,在实验方法和材料部分都会有关于载体构建、诱导表达、蛋白收集纯化等介绍。
13楼2020-03-13 09:53:22
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小熊喵2楼
2020-03-05 20:03   回复  
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2020-03-05 20:15   回复  
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tzynew4楼
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xn80085楼
2020-03-05 20:16   回复  
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2011sp6楼
2020-03-05 20:57   回复  
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haloing8楼
2020-03-05 21:00   回复  
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