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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 真核细胞中融合表达
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liuxu321

新虫 (小有名气)
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真核细胞中融合表达
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有没有做过基因工程蛋白表达方面的，就是基因融合技术，需要在真核细胞中表达，这个一系列过程是怎么样的，需要注意哪些问题，比如怎么选载体，怎么在文献中找这些合适的实验方法，实在看的懵逼

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1楼 2020-03-05 20:02:45
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1272356152

新虫 (正式写手)
★
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我可以有偿提供技术指导

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10楼2020-03-05 23:04:41
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
瞬转还是稳转，稳转就用慢病毒载体

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11楼2020-03-06 11:33:02
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北京艾柏森

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以在网上买分子实验技术，丁香园查找，或者找相关文献。
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12楼2020-03-11 15:42:14
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北京艾柏森

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
常见的真核表达系统：
1.酵母：常用载体pPICZα，宿主菌GS115
2.哺乳动物细胞：常用载体pCDNA3.1，细胞HEK293
3.昆虫杆状病毒：载体bacmid，昆虫SF9细胞
4.枯草芽孢杆菌：载体pHT-43,枯草杆菌
常规实验流程：1）密码子优化，基因合成
2）载体构建
3）转化筛选表达菌株或细胞
4）小试表达测试
5）扩大培养蛋白纯化
选择好相对应的表达系统后，考虑这段基因的表达产物（即蛋白）最后是否需要附加上标签（tag）以用于后续的分离纯化，以及这个标签是加在C末端还是N末端等，然后根据你的实验目的确定你所需要的表达量，是采用一个含有强启动子的载体来过量表达蛋白，还是只需要一个普通的启动子即可。根据以上原则做一个初筛，之后再根据载体说明书进一步筛选，载体说明书上都会有详细的介绍，包括启动子、克隆方法、载体抗性、筛选标记、质粒类型、表达条件等。关于文献，一般搜索相应的表达系统，会有相关的文献出来，在实验方法和材料部分都会有关于载体构建、诱导表达、蛋白收集纯化等介绍。
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13楼2020-03-13 09:53:22
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小熊喵2楼
2020-03-05 20:03   回复  
liuxu321(金币+1): 谢谢参与
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秋土豆香3楼
2020-03-05 20:15   回复  
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tzynew4楼
2020-03-05 20:16   回复  
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xn80085楼
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2011sp6楼
2020-03-05 20:57   回复  
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zhulei03247楼
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haloing8楼
2020-03-05 21:00   回复  
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shaojun04209楼
2020-03-05 21:22   回复  
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