RT-PCR的条带弥散问题（附图） - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

修炼ｉｎｇ，当虫仙……

11楼2009-07-02 09:13:09

gynan123

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是不是引物形成了二聚体和目的基因离得太近了？

12楼2009-07-02 10:44:57

honghui9251

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做这个多少都会有点的你那个做的算不错啦
同意前面几个的意见，补充一点，可以稍微做一下梯度落降PCR

13楼2009-07-02 20:35:04

microant

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14楼2009-07-02 22:28:04

fir2529

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4楼说的蛮好的
本人正在学习中……

15楼2009-07-02 22:52:59

gynan123

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-7-1 10:53:
换新鲜电泳的buffer
然后低压电泳（80V~100V）

另外，35个循环也太过分了吧……你的条带都这么浓了，无法看出差异

电泳液是刚配的，电压110，以为时间能短点，做过30循环的，没出结果

16楼2009-07-04 10:48:14

gynan123

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Originally posted by phyllislhy at 2009-7-1 17:12:
一般用25-30个循环，模板1微升足矣。
建议用2%的琼脂糖来跑胶。
电泳的电压太大，两边的条带都弯的厉害。

琼脂是用2。5％的，1％的行吗？

17楼2009-07-04 10:51:12

gynan123

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Originally posted by yang0071 at 2009-7-1 10:58:
1 循环数太多
2 上样量可适当减少
3 胶似乎有问题，marker都很弥散

上样量该上多少?胶大概是什么问题？

18楼2009-07-04 10:53:19