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gynan123

金虫 (小有名气)

[交流] RT-PCR的条带弥散问题(附图)

总体系25微升
DNTP 各2.5mM 4ul
Mg 25mM  2ul
模板2ul
引物F 0.5ul,R 0.5ul
taq酶 0.25ul
10*buffer 2.5ul
H2O 13.25ul

退火温度59.4度   35个循环。
94度 45秒  59.4度 45秒  72度60秒  
请大家帮我指点一下,我得到的图像很不理想,目的基因弥散很大。
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honghui9251

铜虫 (小有名气)

做这个多少都会有点的 你那个做的算不错啦
同意前面几个的意见,补充一点,可以稍微做一下梯度落降PCR
13楼2009-07-02 20:35:04
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查看全部 18 个回答

112976553

金虫 (小有名气)


gynan123(金币+1):谢谢参与
帮忙顶一下,看高手来解答
2楼2009-07-01 10:52:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


gynan123(金币+1):谢谢参与
换新鲜电泳的buffer
然后低压电泳(80V~100V)

另外,35个循环也太过分了吧……你的条带都这么浓了,无法看出差异
3楼2009-07-01 10:53:52
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yang0071

木虫 (职业作家)


gynan123(金币+1):谢谢参与
1 循环数太多
2 上样量可适当减少
3 胶似乎有问题,marker都很弥散
4楼2009-07-01 10:58:03
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