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czbd2016

铜虫 (小有名气)

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[交流] 有关痰液DNA提取纯化

想请教一下，痰液DNA提取过程中如何纯化？在痰液提取实验前，如果样本痰液时的粘稠状，应该如何处理？

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1楼 2020-02-28 09:37:59

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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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纯化常用柱层析法和氯化铯梯度离心法。常使用的所有纯化方法都利用了质粒DNA 相对较小及共价闭合环状这样两个性质。柱层析法常使用的也就是BIODAI，对于痰液样本的处理，向收集的痰液中加入4倍体积1M NaOH，室温放置30分钟，每10分钟振荡混匀一次（如痰液仍粘稠，可适当延长液化时间），12,000 rpm离心5 min，弃上清，剩余100μL上清，充分振荡混匀15秒。

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5楼2020-02-28 16:26:28

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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

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染料法与探针法的引物可以通用，但是前体是你对PCR体系进行优化，使在保证灵敏度比改变的情况下引物浓度尽量的少。因为染料法对引物二聚体也有荧光信号，以上操作是你要保证引物二聚体尽量少。另外染料法需要做溶解曲线，如果溶解曲线主峰前面的线比较平滑没什么杂峰，说明引物没问题。在曲线这块BIOG和ROCHE还是很典型的。

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9楼2020-03-03 17:02:29

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