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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 求助：纤维素酶活测定的问题
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wkj1015

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助：纤维素酶活测定的问题 已有3人参与

本人利用实验室从酱香大曲中筛选的5株耐高温放线菌测定纤维素酶活，所用培养基：CMC-Na 10g，(NH4)2SO4 4g，Na2HPO4·12H2O4.2g， KH2PO41.4g，  FeSO4·7H2O 0.016g，MgSO4·7H2O 0.5g，蛋白胨3g，酵母浸出物0.162g，蒸馏水1000ml。从斜面上直接挑取少量菌种接种至100ML液体培养基中，在50℃，180r/min条件下，振荡培养3d，经观察，三角瓶中培养基均有大量菌丝体产生，且有两瓶已经浑浊，直接吸取1ml培养液，50℃水浴活化5min后加入4ml0.625%CMC-Na溶液（用PH4.6的醋酸-醋酸钠缓冲液配制，提前也在50℃水浴活化过）在50℃水浴1小时后，立即加入1ml2mol/LNaOH溶液和2mlDNS溶液，在沸水浴中处理5min后用冷水冷却后未变色，与空白样的颜色一致，测不出酶活。反复多次都是不可以。不知道是什么问题？求助。困惑的是观察以CMC-Na为唯一碳源培养后菌株是生产的，而且长的还不错，但是就测不出酶活。有高人能帮忙吗？
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1楼 2020-02-27 19:40:11
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

酵母浸出物，蛋白胨都是含碳的吧，可以测一下培养液中纤维素是否被放线菌所利用？

还有没有可能反应很慢，时间不够，处理时间更长一些？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2020-03-02 14:49:25
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一个不小心就

金虫 (正式写手)
可能是你的酶活性太低了
买点商品纤维素酶做个阳性对照，这样就找到问题所在了
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3楼2020-03-04 19:50:18
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biolio2009

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

纤维素酶活测定方法国家有标准，如果按照那个方法测定与对照没有相差的话，你的菌种可能就不产纤维素酶。如果知道菌种产纤维素酶，而在你做的时候不产酶，那就是你哪里做错了。一般纤维素酶需要培养5天左右才会出现产酶峰值。
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4楼2020-03-12 08:49:51
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wkj1015

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biolio2009 at 2020-03-12 08:49:51
纤维素酶活测定方法国家有标准，如果按照那个方法测定与对照没有相差的话，你的菌种可能就不产纤维素酶。如果知道菌种产纤维素酶，而在你做的时候不产酶，那就是你哪里做错了。一般纤维素酶需要培养5天左右才会出现 ...

是不是我选择的底物有问题呢？我所选择的就是普通分析纯的羧甲基纤维素钠，粘度为300-600
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5楼2021-01-28 18:09:45
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TerryHLHL

铜虫 (小有名气)
请问楼主解决了吗？我也碰到了一样的问题！

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6楼2021-01-29 04:12:07
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wkj1015 at 2021-01-28 18:09:45
是不是我选择的底物有问题呢？我所选择的就是普通分析纯的羧甲基纤维素钠，粘度为300-600...

底物一般没有大问题，不同的羧甲基纤维素钠对于测酶活大小有区别，测酶活有无区别不大。。。
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工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
7楼2021-02-04 21:51:00
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snailli

铜虫 (初入文坛)
现在测出来了吗？什么原因呢？我也碰上了这个问题
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8楼2022-06-17 19:16:15
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