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wanggula

银虫 (小有名气)

[交流] 如何计算细胞蛋白产量

请问用什么方法或者软件计算细胞的蛋白常量(pg per cell per day)?最好能具体点,我不是太清楚,谢谢了!

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-5 at 21:12 ]
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

我都是自己测的。
不知道你是什么细胞,我怎么说呢?

【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2009-06-29 16:51:56
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wanggula

银虫 (小有名气)

是不是有什么特别的计算方法,比如我有个生长曲线,怎么计算这个pg per cell per day值呢
3楼2009-06-29 16:54:55
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

哦,原来是微生物啊!

许多时候,例如Ecoli 单位OD600 的菌体总蛋白 是一个较为固定的值。

所以,做菌体的OD600- DCW曲线,一般都能用。

这个曲线是自己做的。

注意DCW的测定时,细胞离心后一定要用纯水洗至少两遍。
否则培养基成份 在干燥过程中 就被当做DCW的一部分了!
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-06-29 16:59:43
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)

不知道你说的是不是测细胞内蛋白质的含量,如果是的话,你可以取一定量的培养过一定时间的细胞,进行裂解,提取总蛋白进行测量,然后除以细胞数,再除以培养的时间就可以算出pg per cell per day,具体的作如下简单介绍:

蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高,比紫外吸收法灵敏10~20倍,比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
值得注意的是,这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质,因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定,有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的,都有其优缺点。在选择方法时应考虑:①实验对测定所要求的灵敏度和精确度;②蛋白质的性质;③溶液中存在的干扰物质;④测定所要花费的时间。
考马斯亮蓝法(Bradford法),由于其突出的优点,正得到越来越广泛的应用。

望对你的实验有帮助
5楼2009-06-29 17:00:03
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wanggula

银虫 (小有名气)

不是总蛋白,是重组蛋白的产量,比如说根据生长曲线怎么来确定pg per cell per day这个值呢?是不是有什么计算方法或者软件来计算?
6楼2009-06-29 17:06:16
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

原来是

求 产物的比生产速率!

一般单位是 mg Pr/(DCW* Day) 吧。

好像很少用per cell per day
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
7楼2009-06-29 17:31:11
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wanggula

银虫 (小有名气)

能具体点吗?谢谢
8楼2009-06-29 17:32:45
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wanggula

银虫 (小有名气)

比如公式或者有什么软件可以计算?
9楼2009-06-29 17:35:14
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

★ ★ ★ ★ ★ ★
wanggula(金币+6,VIP+0): 6-29 18:55
首先,例如10 mL,

自己测定取样时的所含细胞干重(折合成 DCW, g/L)



重组蛋白总重(mg/L), ----通过SDS-PAGE 和测电泳的总蛋白量 来计算。

可溶性的蛋白,例如生产的是酶的话, 就测定每升发酵液的总酶活。

设P= 重组蛋白总量/DCW

做P-t 曲线,t=时间,例如day, hr等。

然后用excell 求比生产速率。

怎么求,LZ,看下课本。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
10楼2009-06-29 18:00:53
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