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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何计算细胞蛋白产量
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wanggula

银虫 (小有名气)

[交流] 如何计算细胞蛋白产量

请问用什么方法或者软件计算细胞的蛋白常量（pg per cell per day)?最好能具体点，我不是太清楚，谢谢了！

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-5 at 21:12 ]
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1楼 2009-06-29 16:48:23
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
我都是自己测的。
不知道你是什么细胞，我怎么说呢？
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2009-06-29 16:51:56
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wanggula

银虫 (小有名气)
是不是有什么特别的计算方法，比如我有个生长曲线，怎么计算这个pg per cell per day值呢
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3楼2009-06-29 16:54:55
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
哦，原来是微生物啊！

许多时候，例如Ecoli 单位OD600 的菌体总蛋白 是一个较为固定的值。

所以，做菌体的OD600- DCW曲线，一般都能用。

这个曲线是自己做的。

注意DCW的测定时，细胞离心后一定要用纯水洗至少两遍。
否则培养基成份 在干燥过程中 就被当做DCW的一部分了！
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4楼2009-06-29 16:59:43
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)
不知道你说的是不是测细胞内蛋白质的含量，如果是的话，你可以取一定量的培养过一定时间的细胞，进行裂解，提取总蛋白进行测量，然后除以细胞数，再除以培养的时间就可以算出pg per cell per day，具体的作如下简单介绍：

蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford法）。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。
考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。

望对你的实验有帮助
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5楼2009-06-29 17:00:03
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wanggula

银虫 (小有名气)
不是总蛋白，是重组蛋白的产量，比如说根据生长曲线怎么来确定pg per cell per day这个值呢？是不是有什么计算方法或者软件来计算？
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6楼2009-06-29 17:06:16
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HarveyWang

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海外行者
原来是

求 产物的比生产速率！

一般单位是 mg Pr/(DCW* Day) 吧。

好像很少用per cell per day
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7楼2009-06-29 17:31:11
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wanggula

银虫 (小有名气)
能具体点吗？谢谢
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8楼2009-06-29 17:32:45
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wanggula

银虫 (小有名气)
比如公式或者有什么软件可以计算？
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9楼2009-06-29 17:35:14
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★ ★ ★ ★
wanggula(金币+6,VIP+0): 6-29 18:55
首先，例如10 mL，

自己测定取样时的所含细胞干重（折合成 DCW， g/L)

和

重组蛋白总重（mg/L), ----通过SDS-PAGE 和测电泳的总蛋白量 来计算。

可溶性的蛋白，例如生产的是酶的话， 就测定每升发酵液的总酶活。

设P= 重组蛋白总量/DCW

做P-t 曲线，t=时间，例如day， hr等。

然后用excell 求比生产速率。

怎么求，LZ，看下课本。
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10楼2009-06-29 18:00:53
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