| 查看: 1660 | 回复: 21 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
zmj0630金虫 (小有名气)
|
[交流]
减少引物二聚体的方法
|
||
|
1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法； 2. 可能模板有问题； 3. 模板浓度过小，适当加大模板量； 4. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度； 5. 取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的； 6. 所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性； 7. PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体。 8. 增加循环数； 9. 降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）； 10. 若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。 11. 以上次的pcr产物作模板二次pcr，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50－100倍； |
回复此楼» 猜你喜欢
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有21人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有5人回复
-
国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率
已经有8人回复
-
各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。
已经有7人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有48人回复
-
filecode
已经有10人回复
-
奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样
已经有11人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有8人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有37人回复
-
好奇怪的filecode
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
gene112
金虫 (文坛精英)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 贵宾: 0.04
- 金币: 1459.9
- 散金: 3800
- 红花: 23
- 沙发: 12
- 帖子: 12577
- 在线: 845小时
- 虫号: 751817
- 注册: 2009-04-18
- 性别: GG
- 专业: 神经变性、再生及相关疾病
4楼2009-06-28 22:42:15
zhyzx
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1118.4
- 散金: 4
- 红花: 6
- 帖子: 295
- 在线: 34.4小时
- 虫号: 697243
- 注册: 2009-02-06
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2009-06-28 14:47:05
5楼2009-06-28 23:17:09
rainbamboo8707
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 746.2
- 帖子: 255
- 在线: 6.4小时
- 虫号: 668606
- 注册: 2008-12-05
- 专业: 水产生物遗传育种学
6楼2009-06-29 10:15:42
