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田园1983木虫 (正式写手)
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[交流]
发金币求助--磷酸化蛋白检测问题
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我的实验目的： 检测病人和正常人外周血淋巴细胞中某蛋白磷酸化水平的差异 我要检测的蛋白有一个酪氨酸磷酸化位点，本来打算通过elisa和western的方法检测，但是没有查到商品化的用来测该蛋白磷酸化的kit和抗体。好像有商品化的酪氨酸磷酸化抗体，能不能用来测我的目的蛋白？如果可以的话，怎么做呢？或者有没有其他解决办法？ 从来没有做过蛋白磷酸化检测，周围人也没有了解这方面的，请虫友们多多提宝贵意见！小女子跪谢啦！ [ Last edited by 350784478 on 2009-8-5 at 20:57 ] |
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amisking(金币+3,VIP+0):哈哈，最近还真比较活跃啊|！ 6-27 22:42
田园1983(金币+10,VIP+0):非常感谢！ 6-27 22:54
amisking(金币+3,VIP+0):哈哈，最近还真比较活跃啊|！ 6-27 22:42
田园1983(金币+10,VIP+0):非常感谢！ 6-27 22:54
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强烈建议用质谱（MS）方法检测，灵敏度高，特别对氨基酸修饰检测特别合适（如果知道该蛋白质的全序列，那就最好了），因为如果发生磷酸化，相应的质谱峰m/z会发生+91 迁移。另外做质谱价格肯定比抗体Kit便宜不少。许多公司都可以做。 具体过程如下： 如果你是跑胶得到的蛋白，可以用胰酶进行胶内酶切， 然后对酶切得到的肽段进行MS鉴定（MALDI-TOF MS 或者ESI-MS），包括一级谱，二级谱，通过相应肽段的二级谱解谱，就可以鉴定出你要的磷酸化位点。 如果你得到的蛋白在溶液中，可以进行溶液酶切，一下过程如上所述。 祝实验顺利！！！  |
3楼2009-06-27 22:38:59
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