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卷卷康小西

银虫 (小有名气)

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[求助] 酶活测试求助已有1人参与

请问有了解酶偶联反应法的小伙伴吗？
测目标酶活的时候需要加入工具酶辅助耦联，但是，请问怎么样才能保证多次试验中工具酶活性的一致性呢？
没有购买商品酶，这个工具酶每次都是现用现养菌提的，用之前会测有没有活性。这样的话多次测目标酶活的时候，没有办法保证工具酶的活性都是一致的，有小伙伴有类似的经验吗？求大神指点！！！

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1楼 2020-02-09 17:41:21

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pennchem

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【答案】应助回帖

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卷卷康小西: 金币+20, ★★★很有帮助 2020-02-28 22:09:33

1：能把蛋白纯化出来后冷冻分装吗？这样可以每次加入相同的酶，保证实验的可重复性

2：偶联测蛋白活性，一般都是把辅助反应设为过量（即过量的酶，过量的底物），保证要测的酶的活性不受到辅助酶反应的影响

例如： ATP-NADH 经常用于ATP消耗系统的实验，ATP，磷酸烯醇式丙酮酸，NADH及ＰK/LDH酶加入，保证消耗的ATP能迅速被再生，PK/LDH酶在过量的情况下，多加少加对实验的影响是有限的。

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行至水穷处，坐看云起时

2楼2020-02-24 11:00:19