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卷卷康小西

银虫 (小有名气)

[求助] 酶活测试求助 已有1人参与

请问有了解酶偶联反应法的小伙伴吗?
测目标酶活的时候需要加入工具酶辅助耦联,但是,请问怎么样才能保证多次试验中工具酶活性的一致性呢?
没有购买商品酶,这个工具酶每次都是现用现养菌提的,用之前会测有没有活性。这样的话多次测目标酶活的时候,没有办法保证工具酶的活性都是一致的,有小伙伴有类似的经验吗?求大神指点!!!
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

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卷卷康小西: 金币+20, ★★★很有帮助 2020-02-28 22:09:33
1:能把蛋白纯化出来后冷冻分装吗?这样可以每次加入相同的酶,保证实验的可重复性

2:偶联测蛋白活性,一般都是把辅助反应设为过量(即过量的酶,过量的底物),保证要测的酶的活性不受到辅助酶反应的影响

例如: ATP-NADH 经常用于ATP消耗系统的实验,ATP,磷酸烯醇式丙酮酸,NADH及PK/LDH酶加入,保证消耗的ATP能迅速被再生,PK/LDH酶在过量的情况下,多加少加对实验的影响是有限的。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2020-02-24 11:00:19
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