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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫共沉淀能不能用来找未知蛋白
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shike

铜虫 (初入文坛)

[交流] 免疫共沉淀能不能用来找未知蛋白

请问各位高手，免疫共沉淀能不能用来找未知蛋白？如果可以用，用什么方法来验证是否是假阳性？
和酵母双杂交相比，有何优缺点？
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1楼 2009-06-25 15:07:34
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yyn0452

木虫 (正式写手)
★
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个人觉得不行，因为免疫共沉淀以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
未知蛋白，你不知道它的作用搭档，故无法实现
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2楼2009-06-25 21:06:46
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shike

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yyn0452 at 2009-6-25 21:06:
个人觉得不行，因为免疫共沉淀以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整 ...

谢谢回帖，我的意思是用一个已知的蛋白来找相互作用的未知蛋白。
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3楼2009-06-25 21:56:19
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这与你用的抗体的特异性程度有关，特异性不强的，有很大强度的假阳性可能，特异性强的，假阳性程度就相对较低

强烈推荐你用不同的实验方法来验证：比如酵母双杂，或者用以知蛋白的不同抗体来试试能不能同样能抓到你要的新蛋白

祝实验顺利！！！
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4楼2009-06-25 22:05:31
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shike

铜虫 (初入文坛)
谢谢aaaaaa1380  
请问用酵母表面展示来找相互作用蛋白怎么样？
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5楼2009-06-26 10:18:25
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suenmomo

金虫 (小有名气)
理论上不是可以的吗
但是个人觉得最好是用单抗，而且只是针对未知蛋白的特异性抗原位点
酵母双杂交，网上搜下就知道原理了
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6楼2009-06-26 11:07:56
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aaaaaa1380

至尊木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
理论上可以，但是和酵母双杂有其本身的缺陷，如果你是初学者加以你看看他的一些原理，优缺点，顺便给你个网址：
http://nurse.shouxi.net/html/lit ... 3927965_105773.html

如果你想深入了解，推荐你看一本书：蛋白质--蛋白质相互作用(分子克隆手册)


希望对你的实验有帮助
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7楼2009-06-26 11:24:31
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shike

铜虫 (初入文坛)
谢谢 aaaaaa1380  。请问在哪里可以找到这本书的电子版？
我在中国知网上找了找做酵母表面展示的，只找到很少有几家做这个，做的还是抗原表位分析之类的。
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8楼2009-06-27 11:18:47
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
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9楼2009-06-29 11:23:57
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164ly

新虫 (初入文坛)
我也在做这个，还是个膜蛋白，很郁闷老板让用酵母双杂交做，理论上不可行，但老板不死心，我只好硬着头皮做，纠结中。。。
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10楼2009-06-30 20:58:04
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