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VixkXu

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助葡聚糖凝胶色谱LH-20流速问题 已有1人参与

我的样品首先经过大孔树脂HP20粗分,然后再用LH20纯化,75%甲醇洗脱流速1ml/min,但是再洗柱子,逐步将洗脱液换成50%甲醇、25%甲醇、水、NaOH-NaCl溶液,发现在恒流泵转速一定的情况下,流速越来越慢,25%甲醇过渡的时候只有0.5ml/min不到,是不是LH20走水相的流速会很慢吗?还是因为洗脱液里面有杂质,导致柱子堵住了?恳请大家的帮助,这个问题困扰我太长时间了,查找了相关资料也没有解决,之前这样洗柱子还可以,但是现在流速越来越慢,感觉太影响实验速度了。
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高异黄酮

禁虫 (职业作家)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

2楼2020-01-14 15:28:09
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VixkXu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 高异黄酮 at 2020-01-14 15:28:09
LH20一般是用它的分子筛功能,等梯度洗脱为宜,越来越慢可能是因为换梯度后,溶胀系数不同,产生气泡,所以才会流速变慢)

因为是看到很多资料都说,LH20的再生,就是用NaOH和NaCl的混合溶液来脱色,也说是要梯度将洗脱液从甲醇换到水,所以我75%甲醇溶液就两个梯度置换成水,每次过渡一个柱体积,就感觉柱子是往上膨胀,流速就越来越慢,如果这样的话,那我怎么就是脱色洗柱子,难道每次都拆柱子吗,因为我的样品,每过LH20一次,都要再生一次,感觉残留的颜色太深了
3楼2020-01-14 16:25:20
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ZEUSCJP

铁虫 (著名写手)

4楼2020-01-14 18:09:10
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VixkXu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ZEUSCJP at 2020-01-14 18:09:10
可先过MCI

是过了MCI再上LH20吗?,
因为是跨学科读研,过柱子分离这些不是很懂,看了一些资料,越看越迷糊,只能根据文献里面已有的方法进行实验。。
5楼2020-01-14 21:48:10
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ZEUSCJP

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by VixkXu at 2020-01-14 21:48:10
是过了MCI再上LH20吗?,
因为是跨学科读研,过柱子分离这些不是很懂,看了一些资料,越看越迷糊,只能根据文献里面已有的方法进行实验。。...

一般色素重需要先过MCI,要不然对凝胶伤害太大

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6楼2020-01-15 10:55:38
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VixkXu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ZEUSCJP at 2020-01-15 10:55:38
一般色素重需要先过MCI,要不然对凝胶伤害太大
...

那就是说我可以按照HP20-MCI-LH20这样的一个顺序试一试?
7楼2020-01-15 16:42:19
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ZEUSCJP

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by VixkXu at 2020-01-15 16:42:19
那就是说我可以按照HP20-MCI-LH20这样的一个顺序试一试?...

可以

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8楼2020-01-15 18:07:28
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VixkXu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by ZEUSCJP at 2020-01-15 18:07:28
可以
...

你好,最近又突然发现LH20,我就用75%甲醇等度洗脱,过夜洗脱后发现柱子的尾部干了,好几次了,只要上样后柱子尾部就变干,但是用流动相平衡柱子平衡一两天都没事,也考虑了应该不是柱子密封性问题,而且柱子的流速也没有变化,就很纳闷了,所以过来问一问
9楼2020-08-11 13:57:58
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ZEUSCJP

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by VixkXu at 2020-08-11 13:57:58
你好,最近又突然发现LH20,我就用75%甲醇等度洗脱,过夜洗脱后发现柱子的尾部干了,好几次了,只要上样后柱子尾部就变干,但是用流动相平衡柱子平衡一两天都没事,也考虑了应该不是柱子密封性问题,而且柱子的流速 ...

这种情况我也没遇到过

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10楼2020-08-11 17:04:14
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