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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] [求助]质粒如何提取得多一些???

在蓝白筛选中,挑取阳性克隆白色单菌落加入Amp的LB培养基,大家是几管多少毫升摇床培养的????如何才能有效地提取大量的质粒,加培养基LB的量就行了吗??我是用质粒小量提取试剂盒提取质粒的,如果没有提取大量的话,在做双酶切验证的时候就影响了。
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
2ml小提的作双酶切足够了吧.我一般都是同时酶切的,要是分步单酶切的话,每步都要回收,这个可能损失就比较大了.
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-06-24 10:32:23
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fdtjhklj

新虫 (小有名气)

加大培养量就行了.
3楼2009-06-24 10:34:00
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fdtjhklj

新虫 (小有名气)

另外可以抽提多管
4楼2009-06-24 10:39:45
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smallcat227

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
试剂盒效率挺高的2ml应该够了吧
加大培养量也是个办法
5楼2009-06-24 11:38:49
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xiaoyadxy

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做双酶切验证,试剂盒3ml提的应该就够用了,如果想让量更大些,我用得是碱裂解法,不过步骤有点麻烦。
6楼2009-06-24 12:01:00
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tingl0087

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做过是用EP管加1mlLB摇一上午,也使用小剂量试剂盒提的,注意操作时间的控制,可以平行多提几管,效果挺不错的
7楼2009-06-24 13:47:34
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mourning

木虫 (正式写手)

多点细菌……
8楼2009-06-24 16:32:57
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bbyu007

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
多多集菌~~~~~~~~~~~~~~~~
我是笨笨鱼~~~
9楼2009-06-24 17:19:38
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
挑取克隆摇菌30摄氏度过夜,取5-10ml菌液提取质粒,50微升体积洗脱,得率为250ng/ul
10楼2009-06-24 20:05:38
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