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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]质粒如何提取得多一些？？？
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] [求助]质粒如何提取得多一些？？？

在蓝白筛选中，挑取阳性克隆白色单菌落加入Amp的LB培养基，大家是几管多少毫升摇床培养的？？？？如何才能有效地提取大量的质粒，加培养基LB的量就行了吗？？我是用质粒小量提取试剂盒提取质粒的，如果没有提取大量的话，在做双酶切验证的时候就影响了。
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1楼 2009-06-24 10:29:03
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
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2ml小提的作双酶切足够了吧.我一般都是同时酶切的,要是分步单酶切的话,每步都要回收,这个可能损失就比较大了.
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-06-24 10:32:23
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fdtjhklj

新虫 (小有名气)
加大培养量就行了.
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3楼2009-06-24 10:34:00
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fdtjhklj

新虫 (小有名气)
另外可以抽提多管
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4楼2009-06-24 10:39:45
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smallcat227

木虫 (著名写手)
★
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试剂盒效率挺高的2ml应该够了吧
加大培养量也是个办法
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5楼2009-06-24 11:38:49
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xiaoyadxy

金虫 (小有名气)
★
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做双酶切验证，试剂盒3ml提的应该就够用了，如果想让量更大些，我用得是碱裂解法，不过步骤有点麻烦。
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6楼2009-06-24 12:01:00
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tingl0087

金虫 (小有名气)
★
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我做过是用EP管加1mlLB摇一上午，也使用小剂量试剂盒提的，注意操作时间的控制，可以平行多提几管，效果挺不错的
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7楼2009-06-24 13:47:34
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mourning

木虫 (正式写手)
多点细菌……
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8楼2009-06-24 16:32:57
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bbyu007

木虫 (正式写手)
★
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多多集菌~~~~~~~~~~~~~~~~
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我是笨笨鱼~~~
9楼2009-06-24 17:19:38
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
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挑取克隆摇菌30摄氏度过夜，取5-10ml菌液提取质粒，50微升体积洗脱，得率为250ng/ul
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10楼2009-06-24 20:05:38
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