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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 诚意询问，为什么蛋白能表达出来但酶活测不出来？
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ampu314

新虫 (初入文坛)

[交流] 诚意询问，为什么蛋白能表达出来但酶活测不出来？

我的一段基因序列已成功连在PET-29a上转入BL21中能表达出来，（跑SDS-PAGE),但总是测不出酶活性，这是什么原因。我使用PH=8.0的0.01M的TRIS-HCL重悬菌液后压榨破碎的，有什么原因呢，实在想不通，谢谢！
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1楼 2009-06-23 22:23:54
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baiyidao

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得包涵体的问题，你试试复性吧。
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15楼2009-06-25 15:58:20
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houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 6-23 22:52
这个再正常不过了
很多酶表达后是没有活性的
如果没有复性问题，那现在市场上的生物工程药物价格不知道会降多少
尤其是包涵体形式的
主要原因当然是分子没有正确的折叠 形成具有复杂精准的高级结构！
其他，诸如反应条件或者基因突变均有可能！
赞一下(7人) 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
2楼2009-06-23 22:30:34
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
好好查查包涵体的变性复性吧：）
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金币是赌出来的
4楼2009-06-24 09:29:08
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
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估计是包涵体表达的。

另，注意你自己的酶天然的反应条件 与你的测定条件 组分上的差别。
例如，有没有辅基给忘掉了？
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2009-06-24 09:35:42
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